P-Box Incubator

P-BOX（小型恒温箱/培养箱）

◆产品介绍

　　机身后面设有电源线插孔，方便搅拌机及旋转器等小型机器放入仪器内。另外，加入传感器和CCD摄像器更可记录资料在纵放时产生的变化。通过多台机器一起使用，同样的样品也可在不同的温度下同时进行培养。要是作为各个样品的专用机床使用，更能为防止交叉感染。不仅可以用于培养，还能作为保温库保管试剂。

注意：

1、长期运转时请在环境温度稳定的情况下使用。

2、附有一个简易的棒式温度计，可用于大致测量温度。

◆优点・特色

●　紧凑、不占用空间，可设置在狭窄的场所

●　重量轻、便于携带

●　利用手动复位型温控器的过热防止功能，可防止过度升温

●　设有电缆空间，可放入温度传感器，记录温度随时间变化

●　内层经过特殊表面处理，防止细菌粘附

◆案例・应用

       可用于食品的细菌检查和厌氧性细菌的培养。用于在净化台上操作的样品被送入大型孵化器的保温。与AnaeroPack并用，用于牙科的厌氧培养或食品检查中检测弧形杆菌，螺杆菌。

常见问题

球状体·细胞透明化试剂

SCALEVIEW^®-S4

SCALEVIEW^®-S是组织透明化试剂。可通过使用SCALEVIEW^®-S0 – SCALEVIEW^®-SMt等六种产品进行组织透明化处理。

其中，可单独使用SCALEVIEW^®-S4透明化球状体或细胞。只需将目标样品浸入SCALEVIEW^®-S4即可。

◆特点

●　只需浸泡即可实现简单透明化

●　透明化耗时短（1日左右）

●　不需要特殊的设备

●　可配合荧光抗体标记和荧光素观察

◆T47D细胞球状体观察实例

Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

图1. SCALEVIEW^®-S4透明化T47D细胞球体的图像示例（细胞核使用Hoechst染色）^4）。

       使用共聚焦显微镜Z-堆叠获得的球状体图像。

图2. T47D细胞球状体经诺考达唑处理后，使用组蛋白H3抗体的测量实例。

       通过SCALEVIEW^®-S4的透明化处理，可观察药物施用对球状体表面和内部的影响。

◆操作步骤图示

◆SCALEVIEW^®-S4 Neurosphere的观察实例

数据提供：

国立研究开发法人理化学研究所

脑神经科学研究中心细胞技能探索技术研究组/ 光量子工学研究中心生命光学技术研究组 滨裕先生、星田哲志先生、宫脇敦史先生

协助：olympus 株式会社

Neurosphere的观察实例

（※试剂使用量推荐前处理和透明化均为各试剂：1.2mL。※荧光抗体标记基于AbScale方案。）

*透明化后，使用1.5％（wt / vol）琼脂糖嵌入并固定。

成年大鼠海马神经干细胞神经球状体的三维免疫荧光　　—使用AbScale法—

参考文献

1)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3)　Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4)　Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

◆产品信息

◆相关产品

相关资料

透明化试剂方法选择流程.pdf

组织透明化试剂Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q：组织透明化的原则

Ａ：组织透明化通常是按下面的步骤进行的：

Ａ：（a）固定 （b）透化 （c）脱色 （d）折射率匹配

Q：组织透明化的优势

Ａ：目前大多数可用的透明化技术，都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记，从而可视化

Ａ：组织中特定的蛋白。组织透明化成为了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。

Q：透明化技术的比较

Ａ：下面是水性的透明化技术。

Ａ：SeeDB（基于果糖的方法）在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂，所以对于透明化DiI(细胞膜

Ａ：红色荧光探针，一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜（CLEM）的情况下，SeeDB有着一定优

Ａ：势。另外SeeDB会产生自体荧光，有时候会对辨认未标记的神经元结构（如神经毡）起着一定帮助。

Ａ：SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术；因此，当处理较大的组织时，CLARITY或者CUBIC

Ａ：会是更好的选择。

Q：切片厚度的最大值和最小值？

Ａ：您应该根据您的物镜的WD（工作距离）来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄

Ａ：且脆弱的样品，我们建议使用琼脂糖包埋。

Ａ：使用CUBIC，可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。

Q：试剂盒成分

Ａ：具体如下：

Ａ：1. SCALEVIEW-S试剂盒（299-79001）适用于20份1-2mm的切片样品

Ａ：Ａ：1）　SCALEVIEW-S0——100mL

Ａ：Ａ：2）　SCALEVIEW-S1——100mL

Ａ：Ａ：3）　SCALEVIEW-S2——100mL

Ａ：Ａ：4）　SCALEVIEW-S3——100mL

Ａ：Ａ：5）　SCALEVIEW-S4——100mL

Ａ：Ａ：6）　SCALEVIEW-SMT——100mL

Ａ：2. SCALEVIEW-S试剂盒（290-80801）适用于20-30份1-2mm的切片样品。

Ａ：Ａ：1）　SCaleCUBIC-1 Solution——250mL

Ａ：Ａ：2）　SCaleCUBIC-2 Solution——250mL

Ａ：Ａ：3）　Mounting Solution 1——40mL

Ａ：Ａ：4）　Mounting Solution 2——40mL

Ａ：3. SeeDB试剂盒（299-79901）适用于20-30份1-2mm的切片样品。

Ａ：Ａ：1）　SeeDB：20w/v% Fructose Solution——50mL

Ａ：Ａ：2）　SeeDB：40w/v% Fructose Solution——50mL

Ａ：Ａ：3）　SeeDB：60w/v% Fructose Solution——50mL

Ａ：Ａ：4）　SeeDB：80w/v% Fructose Solution——50mL

Ａ：Ａ：5）　SeeDB：100w/v% Fructose Solution——50mL

Ａ：Ａ：6）　SeeDB——50mL

Ａ：4. SeeDB2试剂盒（294-80701）适用于20-30份1-2mm的切片样品。

Ａ：Ａ：1）　Saponin（皂角苷）——5g

Ａ：Ａ：2）　SeeDB2G solution——50mL

Ａ：Ａ：3）　SeeDB2S solution——50mL

Ａ：Ａ：4）　PBS——50mL

Q：样品的保存

Ａ：SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的

Ａ：荧光信号。

Ａ：CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。

Ａ：SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年，而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观

Ａ：察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。

Q：抗体的荧光标记

Ａ：应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。

Q：适用于SCALEVIEW-S的显微镜

Ａ：SD-OSR（Olympus）

Ａ：FV-OSR（Olympus）

Q：适用于CUBIC的显微镜

Ａ：SD-OSR（Olympus）

Ａ：FV-OSR（Olympus）

Ａ：Zeiss Lightsheet Z.1（Carl Zeiss）

Q：适用于SeeDB2的显微镜

Ａ：Confocal（最好使用高NA的油浸镜头）

Ａ：STED（Leica Microsystems）

Ａ：SR-SIM（Carl Zeiss）

Ａ：SD-OSR（Olympus）

Ａ：FV-OSR（Olympus）

Ａ：Airyscan（Carl Zeiss）

Ａ：HyVolution（Leica Microsystems）

Ａ：Two-photon（最好使用复合浸没镜头）

Ａ：Confocal（最好使用高NA的甘油浸镜头）

Ａ：Light-sheet DLS（Leica，最好使用定制镜面的设备）

Q：重构

Ａ：对于定量用途，我们建议使用Neurolucida系统（MBF）。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表

Ａ：现。重构时也可以使用开源软件。例如，Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。

Q：物镜推荐

Q：其他物种？其他器官？

Ａ：对于昆虫样品和鱼类样品，建议选择CUBIC。

Ａ：昆虫相关文献：Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

Ａ：鱼类相关文献：Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

　　对于多细胞球状体，选择SCALEVIEW-S会更好。

　　https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0

参考文献

1)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3)　Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4)　Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

新烟碱系农药混合标准液

　　新烟碱类农药广泛使用于稻子、果树、蔬菜、花等中，被怀疑是近年来世界蜜蜂减少问题的原因之一，已有国家开始限制使用。

　　和光有新烟碱类农药及其代谢物的混合标准液、前处理柱、HPLC分析柱，可以用于农药的同时分析。

◆新烟碱类农药混合标准液（各20μg/mL乙腈溶液）

10成分混合标准液的分析例

表1 混合成分

【装置】

LC/MS-2020（岛津）

【LC】

分析柱 : Wakopak^® Ultra C18-3, 2.0mm×100mm

洗脱液：A) 0.1 vol％甲酸－5mM醋酸铵溶液

        B) 甲醇

梯度 : 0-10min. B conc.10％

       10-30min. B conc.10-70％

流　速 : 0.2mL/min. at 30℃

注入量 : 0.5μL

【MS】

离子法：ESI、positive mode

固相萃取柱采集例

　　新烟碱类农药混合标准液的混合成分10成分加上代谢物6-氯烟酸 、以及由于结构式相似而检测的相关农药氟啶虫酰胺共12成分，讨论这12成分的回收率。固相萃取条件图1，回收率结果图2显示。 

　　在250mL水中添加标准品，使用反相系聚合物树脂的充填固相萃取柱Presep^® RPP（填充量500㎎），能高效率回收6-氯烟酸以外的农药及代谢物。

　　代谢物CPMF的洗脱需要增加溶剂量实现回收。

　　同时，使用反相模式和离子交换模式共有的Presep^® RPP-离子交换柱4种，能使农药和特定代谢物分离洗脱。

图1　固相萃取条件

表2　250mL水样的回収率（各添加0.2ng/mL）

◆产品

相关产品

混合农药成分　单一标准品

新烟碱系农药代谢物、相关农药（混合成分以外）

分析柱 :  Wakopak® Ultra系列

Wakopak^® Ultra是能使用的pH范围广、碱性条件下能使用且具有高耐久性的ODS柱。另有尺寸不同粒子径5μm的分析柱。详细请咨询。

固相萃取柱 :  Presep® 系列

各种填充剂、填充量的萃取柱产品丰富。

Wakopak^® Wakosil-Ⅱ 3C18 系列 高灵敏度和LC/MS分析

短柱用于高灵敏度和LC/MS分析

◆特点

1.    全多孔，球形3μm填充材料。

2.    与5μm相比，提高了理论板数和分离能力，进而缩短了柱长。

3.    包括HG, RS, AR三种型号，易于更换分析条件。

4.    减少溶剂量，节约自然资源。

5.    可分析小量样品和灵敏性分析。

6.    与LC/MS兼容

不同柱长 Wakosil-II 5C18 HG 性能比较（分析防腐剂尼泊金）

样品：
1）对羟基苯甲酸甲酯
2）对羟基苯甲酸乙酯
3）对羟基苯甲酸异丙酯
4）正丙基对羟基苯甲酸
5）仲 – 丁基对羟基苯甲酸
6）异丁基羟基苯甲酸
7）正丁基羟基苯甲酸

流动相：5mM甲醇柠檬酸缓冲液（pH4.0）
流速：40℃，0.8ml/min
检测器：UV 270nm