总膳食纤维检测试剂盒K-TDFR-200A中文说明书

1. 简介: 膳食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和,包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质,如树胶、海藻多糖等组分;另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素;不被人体消化酶所分解的物质,如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成分,如蜡纸、角质、软木脂等。 总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43,AOAC 985.29,AACC32-07和AACC 32-05方法开发的,也适用于其它方法,如AACC Method 32-21,AACC method32-06。 2. 检测原理 脱脂(如大于10%)干燥后的样品经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化,酶解液通过乙醇沉淀、过滤,乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重,得到总膳食纤维(TDF)残渣; 酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣,干燥后称重,得到不溶性膳食纤维(IDF)残渣; 滤液用乙醇沉淀,过滤、干燥、称重,得到可溶性膳食纤维(SDF)残渣。 TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。 该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶,酶的活力是标准化的,而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。 淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶,而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物,这将导致溶解和低估β-葡聚糖。 该试剂盒提供的酶都是稳定的液体,可以保存到试剂盒有效期,并且是直接应用液,不需要使用前再溶解。 3. 用途 适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维(TDF)、不溶性 膳食纤维(IDF)和可溶性膳食纤维(SDF)的检测。 4. 提供试剂及材料 每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验,如另外需要可单独订货: Bottle 1 ,1瓶: 热稳定a-淀粉酶(20mL,~ 3,000 U/mL,Ceralpha method;~ 10,000 U/mL on soluble starch。). Bottle 2,1瓶: 纯化的蛋白酶(20mL,50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。) Bottle 3,2瓶: 淀粉葡萄糖苷酶(20mL,3300 U/mL on soluble starch。) 总计:80ml(4瓶20ml包装) 另外,实验中需要用到硅藻土: 酸洗硅藻土Celite?545,100g或500g包装,(货号:G-CEL100,G-CEL500) 其他相关试剂盒: 膳食纤维质控试剂盒(货号:K-TSCK) 质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度,含下表中所列物质每种一瓶,并附有技术数据单(K-TSCK),盒中每种物质足够10次测试用。 品种 数量 β-葡聚糖(大麦) 1.0g 高直链玉米淀粉 10.0g 淀粉(小麦) 10.0g 酪蛋白 5.0g 果胶 1.0g 5. 需要的设备和试剂 5.1 设备 A. 高型无导流口烧杯:400mL或600mL B. 坩埚:具粗面烧结玻璃板,孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜,用真空泵除去硅藻土和灰分,室温下用2%清洗液浸泡1小时,用水和蒸馏水冲洗干净,用15 mL丙酮冲洗后风干,加1g硅藻土到干燥的坩埚中,在130℃干燥至恒重,在干燥器中冷却1小时,记下坩埚(包括硅藻土)的重量。 C. 真空溶剂过滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器,1L的抽滤瓶,侧壁有抽滤口,以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。 D. 恒温振荡水浴:95-100℃ E. 分析天平:感量0.1mg F. 天平(台秤):4 000g量程,感量0.1g G. 马福炉:525±5°C, H. 烘箱:103±2℃,130±3℃ I. 真空干燥箱 J. 干燥器:二氧化硅或等同干燥剂 K. PH计,具有温度补偿功能。 L. 微量凯氏定氮仪。 M. 移液器,50-200 μL,5 mL,一次性移液吸头。 N. 计时器。 O. 橡胶刮勺 P. 磁力搅拌器 5.2 试剂 A. 95%乙醇(体积比), B. 78 %乙醇:取821mL95%乙醇置于容量瓶中,用水稀释到刻度,混匀。 C. 丙酮 D. 蒸馏水或去离子水 E. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).,配成2%液体 F. MES/TRIS缓冲液(0.05mol/L):称取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g (TRIS) (Sigma,T1503)