日本同仁化学核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 

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核染色用色素 -Cellstain®- AO solution Cellstain®- AO solution

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®- AO solution

核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

核染色用色素

  • 製品コード
    A430  –Cellstain®- AO solution
  • CAS番号
    65-61-2(AO)
  • 化学名
    3,6-Bis(dimethylamino)acridine, hydrochloride, solution
  • 分子式・分子量
    C17H20ClN3=301.81
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 ml ¥6,000 348-07911
  • 核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 
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マニュアル

  • プロトコル 核染色用色素 -Cellstain®- AO solution  細胞を染色したい
    核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 
  • パンフレット 核染色用色素 -Cellstain®- AO solution  細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 

参考文献

参考文献を表示する

1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, "An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations", J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.
2) N. Miyoshi, K. Hara, I. Yokoyama, G. Tomita and M. Fukuda, "Fluorescence Lifetime of Acridine Orange in Sodiu Dodecyl Sulfate Premicellar Solutions", Photochem. Photobiol., 1988, 47(5), 685.
3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, "Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms", Cytometry, 1991, 12, 330.
4) Y. Miyakoshi, H. Yohioka, Y. Toyama, Y. Suzuki and H. Shimizu, "The Frequencies of Micronuclei Induced by Cisplatin in Newborn Rat Astrocytes Are Increased by 50-Hz, 7.5- and 10-mT Electromagnetic Fields", Environ. Health and Prev.ive Med. 2005, 10(3), 138.

よくある質問

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。

蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。
【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度が
EBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを
利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい

A

核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

AOの使用方法を教えて下さい。

A

下記に一例を示します。
*細胞の種類、観察条件により濃度や固定の検討が必要です。

○HeLa細胞を用いた細胞染色
①AO 1 mgを純水 1 mLに溶解し、ストック溶液とする。
②ストック溶液10 μLをPBS緩衝液5 mLで希釈する。(AOは約6 μmol/Lとなる)
③HeLa細胞をトリプシン-EDTAなどで回収し、細胞の懸濁液を準備する。
④この細胞懸濁液を遠心分離する。(1000 rpm, 3 min)
上清を除き、PBSを添加し、ピペッティングで十分分散させる。
(この時、細胞数が105~106 cells/mLになるように調整する)
⑤1.5 mlマイクロチューブに④で得た細胞懸濁液30 μLを添加する。
⑥これに②のAO溶液15 μLを添加し、37℃で15分インキュベートする。
⑦カバーガラス上に⑥の溶液10 μLをのせ、上からもう1枚カバーガラスを重ねる。
⑧このカバーガラスを蛍光顕微鏡に置き観察する。
蛍光特性:λex=502 nm, λem=526 nm(dsDNA)、λex=460 nm, λem=650 nm(ssDNA)

○未固定細胞のDNA-RNAの同時染色の例
・Z.Darynkiewicz, Methods Cell Biol.,33,285(1990)より
①Detergent溶液を調整する。保存は4℃以下で行なう。
Triton X-100(100 μL), 1.0 mol/L HCl(8 mL), NaCl(877 mg)を純水に溶解し100 mLとする。
最終濃度はそれぞれ0.1%, 0.08 mol/L, 150 mmol/L となる。

②色素溶液を調整する。保存は4℃以下で行なう。
1)100 mmol/Lクエン酸(37 mL)と200 mmol/L Na2HPO4(63 mL)を混和し、100 mLの溶液を作成する。
2)NaCl(877 mg)を加えて溶解する。
3)EDTA・2Na(34 mg)を加えて溶解する。
4)AO stock solution(1 mg/mL in H2O)600 μLを加える。
*最終濃度は、AO:20 μmol/L, EDTA・2Na:1 mmol/L, NaCl:150 mmol/L

③検体溶液(2×105 cells/mL以下)200 μLにdetergent溶液400 μLを加え、
氷浴中に15秒静置する。不要な細胞の分解を防ぐ為に、検体倍地中に
血清を10~20%(v/v)含む方が望ましい。

④氷水で冷却した色素溶液1.2mLを加え、その後3~15分の間に測定を行なう。

⑤フローサイトメトリーで測定する。
励起波長は488 nmを使用。蛍光フィルターとして520-580 nm(dsDNA), 620 nm(RNA,ssDNA)
などのバンドパスフィルターを使用する。
蛍光特性:λex=502 nm, λem=526 nm(dsDNA)、λex=460 nm, λem=650 nm(ssDNA)

核染色用色素 -Cellstain®- AO solution  核染色用色素 -Cellstain®- AO solution 

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色~橙色液体の凍結品である。
含量: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷凍,遮光
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関連製品

日本同仁化学イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1 

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イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1 Bisthiourea-1

11 イオン電極用試薬

Bisthiourea-1

イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―イオノフォア

  • 製品コード
    B432  Bisthiourea-1
  • CAS番号
    187404-67-7
  • 化学名
    2,7-Di-tert-butyl-9,9-dimethyl-4,5-bis(N’-n-butylthioureido)xanthene
  • 分子式・分子量
    C33H50N4OS2=582.91
容 量 メーカー希望
小売価格
¥特注品
  • イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1 
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マニュアル

  • プロトコル イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1 

技術情報

溶解例

50 mg/mL(テトラヒドロフラン)

参考文献

参考文献を表示する

    1) K. P. Xiao, P. Buhlmann, S. Nishizawa, S. Amemiya and Y. Umezawa, "A Chloride Ion-Selective Solvent Polymeric Membrane Electrode Based Forming Ionophore", Anal. Chem., 1997, 69(6), 1038.
    2) P. Buhlmann, S. Nishizawa, K. P. Xiao and Y. Umezawa, "Strong Hydrogen Bond-Mediated Complexation of H2PO4- by Neutral Bis-Thiourea Hosts", Tetrahedron, 1997, 53(5), 1647.

取扱条件

取扱条件
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イオン電極用試薬―イオノフォア Bisthiourea-1 

関連製品

日本同仁化学細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

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細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞毒性

細胞毒性測定キット

  • 優れたコストパフォーマンス
  • 冷蔵で6ヶ月保存可能なWorking Solution
  • 1つのキットで、ホモジニアス測定、ノンホモジニアス測定の選択が可能
  • 製品コード
    CK12  Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥10,200 347-91751
500 tests ¥27,000 343-91753
2000 tests ¥40,400 341-91754

<お知らせ>
 取扱説明書を改訂しました。(2022/01/18)

キット内容
100 tests ・Dye Mixture
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution
×1
11 ml×1
1.1 ml×1
5.5 ml×1
500 tests ・Dye Mixture
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution
×1
55 ml×1
5.5 ml×1
27.5 ml×1
2000 tests ・Dye Mixture
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution
×4
55 ml×4
5.5 ml×4
27.5 ml×4

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
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マニュアル

  • 取扱説明書 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST  日本語
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 取扱説明書 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST  English
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞傷害性試験(ADCC) 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST  日本語:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST を用いた抗体依存性細胞障害測定用
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
  • 細胞傷害性試験(ADCC) 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST  English:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST を用いた抗体依存性細胞障害測定用
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

技術情報

測定原理

本キットは、生細胞と反応せず、かつ、細胞にダメージを与えないため、生細胞と死細胞が混在する細胞培養液中に直接試薬を加えても細胞傷害を測定することが可能である(ホモジニアスアッセイ)。なお、一般的に用いられる細胞培養液を取り出してLDH活性を測定する方法も可能である(ノンホモジニアスアッセイ)。また、安定性の高い試薬を用いているため、調製した溶液は長期間保存でき、用時調製する必要がない。そのため、多検体アッセイから、少ない検体数の測定にも対応することができる。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

実験例 生細胞測定と死細胞測定の併用した細胞毒性試験

HeLa 細胞にMitomycin C を添加した際の細胞毒性をCell Counting Kit-8とCytotoxicity LDH Assay Kit-WST(本製品)を用いて測定しました。Cell Counting Kit-8による細胞内代謝活性を指標とした方法とCytotoxicity LDH Assay Kit-WSTを用いた細胞膜損傷による遊離LDHを指標とした方法では各々の指標が異なるため、細胞毒性が現れる薬剤濃度に違いがあることが確認されました。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

試験物質 Mitomycin C
細胞 HeLa
使用培地 MEM, 10% FBS
インキュベート 37℃, 5% CO2, 48時間
検出波長

Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (490 nm)

生細胞・死細胞の測定をお得なセットで! Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
生細胞測定:Cell Counting Kit-8と、死細胞測定:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST(各500 tests)のお得なセットです。

技術や使用製品に関する補足

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
    Cell Counting Kit-8

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

    生細胞・死細胞測定キットセット
    Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

抗がん剤ドキソルビシン(DOX)による細胞毒性メカニズム

近年、細胞毒性評価の際に併せて抗酸化能に関与する指標 (NADP+/NADPHやGSSG/GSH等)を測定するケースが増えています。
本項目では抗酸化能の低下が細胞毒性発現に関与するDOXの例をご紹介します。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

技術や使用製品に関する補足

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

    細胞内代謝測定キット

    NADP/NADPH Assay Kit-WST

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

    グルタチオン測定キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

    代謝と疾患の関連性を示した報告例

    これからはじめる細胞内代謝

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1) 細胞
(C3H10T1/2)
S. F. Jin, H. L. Ma, Z. L. Liu, S. T. Fu, C. P Zhang, Y. He, "XL413, a cell division cycle 7 kinase inhibitor enhanced the anti-fibrotic effect of pirfenidone on TGF-β1-stimulated C3H10T1/2 cells via Smad2/4.", Exp Cell Res., 2015, 339, (2), 289.
2) 細胞
(HepG2)
S. Watanabe, C. S. Moniaga, S. Nielsen, M. Hara-Chikuma, "Aquaporin-9 facilitates membrane transport of hydrogen peroxide in mammalian cells.", Biochem Biophys Res Commun ., 2016, 471, 191.
3) 細胞
(HEECs, Human Esophageal Epithelial Cells)
L. Wu, T. Oshima, J. Shan, H. Sei, T. Tomita, Y. Ohda, H. Fukui, J. Watari, H. Miwa , "PAR-2 activation enhances weak acid-induced ATP release through TRPV1 and ASIC sensitization in human esophageal epithelial cells.", Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol ., 2015, 309, G695.
4) 細胞
(Human L02 Hepatocyte)
D. Zhou, B-H Li, J. Wang, Y-N Ding, Y. Dong, Y-W Chen and J-G Fan, "Prolyl Oligopeptidase Inhibition Attenuates Steatosis in the L02 Human Liver Cell Line.", PloS ONE., 2016, 11, (10), e0165224.
5) 細胞
(Human primary Hepatocyte)
T. Fukami, A. Iida, K. Konishi, M. Nakajima , "Human arylacetamide deacetylase hydrolyzes ketoconazole to trigger hepatocellular toxicity", Biochem. Pharmacol., 2016, 116, 153.
6) 細胞
(Mouse embryonic fibroblast:MEF)
Y. Takanezawa, R. Nakamura, Y. Sone, S. Uraguchi and M. Kiyono, "Atg5-dependent autophagy plays a protective role against methylmercury-induced cytotoxicity", Toxicol. Lett., 2016, 262, 135.
7) 細胞
(neural stem/progenitor cells)
M. Tanaka, M. Yoneyama, T. Shiba, T. Yamaguchi, K. Ogita, "Protease-activated receptor-1 negatively regulates proliferation of neural stem/progenitor cells derived from the hippocampal dentate gyrus of the adult mouse ", J Pharmacol Sci., 2016, 131, (3), 162
8) 細胞
(Primary cultured cortical neurons)
S. Wakatsuki, A. Furuno, M. Ohshima, and T. Araki, "Oxidative stress-dependent phosphorylation activates ZNRF1 to induce neuronal/axonal degeneration", J Cell Biol., 2015, 211, (4), 881.
9) 細胞
(DLD1 and AGS cells)
A. Ishijima, K. Minamihata, S. Yamaguchi, S. Yamahira, R. Ichikawa, E. Kobayashi, M. Iijima, Y. Shibasaki, T. Azuma, T. Nagamune & I. Sakuma, "Selective intracellular vaporisation of antibody-conjugated phase-change nano-droplets in vitro", Scientific Reports ., 2017, DOI:10.1038/srep44077.
10) 細胞
(U87, HUVEC cell)
N. Li, W. Zhang, M. Khan, L. Lin, JM. Lin, "MoS2-LA-PEI nanocomposite carrier for real-time imaging of ATP metabolism in glioma stem cells co-cultured with endothelial cells on a microfluidic system", Biosens Bioelectron., 2017, 99, (2018), 142.
11) 組織
(マウス肝臓)
Y. Sakurai, W. Mizumura, M. Murata, T. Hada, S. Yamamoto, K. Ito, K. Iwasaki, T. Katoh, Y. Goto, A. Takagi, M. Kohara, H. Suga, and H. Harashima, "Efficient siRNA delivery by lipid nanoparticles modified with a non-standard macrocyclic peptide for EpCAM-targeting", Mol. Pharm.., 2017,10.1021/acs.molpharmaceut.7b00362.
12) 細胞
(Human pleural mesothelial cell)
K. Hattori, K. Nakadate, A. Morii, T. Noguchi, Y. Ogasawara, K. Ishii., "Exposure to nano-size titanium dioxide causes oxidative damages in human mesothelial cells: The crystal form rather than size of particle contributes to cytotoxicity.", Biochem. Biophys. Res. Commun.., 2017,10.1016/j.bbrc.2017.08.054.
13) 組織
(murine distal colon)
H. Sakai, S. Tabata, M. Kimura, S. Yabe, Y. Isa, Y. Kai, F. Sato, T. Yumoto, K. Miyano, M. Narita and Y. Uezono, "Active Ingredients of Hange-shashin-to, Baicalelin and 6-Gingerol, Inhibit 5-Fluorouracil-Induced Upregulation of CXCL1 in the Colon to Attenuate Diarrhea Development", Biol. Pharm.Bull.., 2017, 40, (12), 2134.
14) 細胞
(SH-SY5Y cell)
R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.
15) 細胞
(MC3T3-E1[マウス頭蓋冠由来])
A. Oyane, M. Nakamura, I. Sakamaki, Y. Shimizu, S. Miyata and H. Miyaji, "Laser-assisted wet coating of calcium phosphate for surface-functionalization of PEEK", PLoS ONE ., 2018, doi:10.1371/journal.pone.0206524.
16) 細胞
CRC細胞 [大腸がん]、HT29細胞[ヒト結腸腺癌]
T. Fuji, Y. Umeda, A. Nyuya, F. Taniguchi, T. Kawai, K. Yasui, T. Toshima, K. Yoshida, T. Fujiwara, A. Goel and T.Nagasaka, "Detection of Circulating MicroRNAs with Ago2 Complexes to Monitor the Tumor Dynamics of Colorectal Cancer Patients during Chemotherapy.", Int. J. Cancer., 2018, doi: 10.1002/ijc.31960 .
17) 細胞
(SFXN2ノックアウトHEK293)
E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci., 2018, doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
18) 細胞
(Human umbilical vein cell line [EA.Hy926])
Y. Xu, C. Huang, M. Liu, N. Chen, W. Chen, C. Yang, Y. Zhao, X. Li, J. Duan, S. Liu and S. Yang, "Survivin regulated by autophagy mediates hyperglycemia-induced vascular endothelial cell dysfunction", Exp. Cell Res.., 2018, doi: 10.1016/j.yexcr.2018.01.037.
19) 細胞
(MIAPaCa-2[ヒト膵臓がん])
M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, "Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis", Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
20) 細胞
(Fibro adipogenic progenitor cells:FAPs)
Y. Saito, T. Chikenji, T. Matsumura, M. Nakano and M. Fujimiya, "Exercise enhances skeletal muscle regeneration by promoting senescence in fibro-adipogenic progenitors", Nat. Commun., 2020, doi:10.1038/s41467-020-14734-x.
21) 細胞
(HEK-293EBNA)
M. Suzuki, A. Urabe, S. Sasaki, R. Tsugawa, S. Nishio, H. Mukaiyama, Y. Murata, H. Masuda, M. Aung, A. Mera, M. Takeuchi, K. Fukushima, M. Kanaki, K. Kobayashi, Y. Chiba, B. Shrestha, H. Nakanishi, T. Watanabe, A. Nakayama, H. Fujino, T. Kobayashi, K. Tanino, N. Nishizawa and K. Namba., "Development of a mugineic acid family phytosiderophore analog as an iron fertilizer", Nat. Commun., 2021, doi:10.1038/s41467-021-21837-6.

よくある質問

Q

490 nm以外の吸収フィルターで測定できますか?

A

弊社では490 nmを推奨していますが、490±2-3 nm程度の違いは問題ありません。490 nm以外では、450 nmのフィルターは弊社でも使用実績があり、使用可能です。但し、吸光度値は490 nmと比較し高くなります。

Q

毒性試験でCell Counting Kit-8との相関性はありますか?

A

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WSTとCell Counting Kit-8では、測定原理が異なるために必ずしも相関性は得られません。そのため、細胞毒性試験の場合には、遊離LDH測定法とCell Counting Kit-8など数種の指標で測定いただくことをお勧めします。
・Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST:細胞膜の損傷により培地中に漏れ出したLDH活性を測定(細胞膜損傷が指標)
・Cell Counting Kit-8:細胞内の代謝活性(デヒドロゲナーゼ)を測定(代謝活性が指標)

Q

LD50値が過去の測定値と大きく異なります。なにか対処法はありますか?

A

・細胞の状態によって、被験物質による影響の受け方が変わりLD50値に影響します。ご使用になる細胞は、継代条件や継代回数をコントロールし、可能な限り同じ状態の細胞をお使い下さい。
・被験物質の希釈系列を調製する際の希釈倍率を狭くすることで、より信頼性の高いLD50値を導き出すことができます。
下記の要領で、使用する被験物質濃度を設定されることをおすすめします。

検討の流れ

① 被検物質が利用できる最高濃度を基準に10倍希釈を繰り返し、5-6桁程度の広い検体濃度域で毒性試験を実施する。[図①]
(①の操作で、毒性が現れる濃度域の予測最高濃度の目安をつける)
② ①の結果から、その被検物質の濃度が現れる濃度の予測最高濃度(100%致死を生じる最低濃度)を基準に2倍希釈を繰り返し、2-3桁をカバーする濃度域で毒性試験をする。[図②]
③ ②の手順を繰り返し、最終的に細胞毒性が20-80%の間に少なくとも検体濃度が3点以上プロットできる濃度域を設定する。[図③]

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

Q

LDHのアイソザイムの測り分けはできますか?

A

本製品は、トータルのLDH活性を指標とした細胞毒性測定用となりますので、LDH1, LDH2, LDH3等の活性の測り分けはできません。

Q

LDHはどの程度安定ですか?

A

以下のような報告例があります。
培地中でのLDH活性の低下は1日で5%以下(文献1)、また、冷蔵保存では約1週間は安定と報告されています(文献2)。なお、安定性は評価条件等により変化する可能性があります。
ご理解の上、下記論文をご参考ください。

文献1:
A. Wagner, A. Marc, JM. Engasser, A. Einsele, "The use of lactate dehydrogenase (LDH) release kinetics for the evaluation of death and growth of mammalian cells in perfusion reactors.", Biotechnol Bioeng199239, (3), :320..
文献2:
M. Allen, P. Millett, E. Dawes, N. Rushton., "Lactate dehydrogenase activity as a rapid and sensitive test for the quantification of cell numbers in vitro.", Clin Mater199416, (4), 189.

Q

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WSTにLDH標準品は入っていますか?

A

細胞毒性試験用のため、LDH標準品は同梱しておりません。LDH活性も測定する場合は、別途、お買い求めください。

Q

Stop solution添加後すぐに測定する必要はありますか?

A

Stop solution添加後、3時間以内に測定してください。その場合は、プレートを遮光してください。

Q

ウェル間でバラツキが多いのですが何が原因でしょうか?

A

以下の要因が考えられますので、ご確認ください。

①培地の表面に気泡が発生している。

以下の方法で気泡を除去してください。
・シリンジや注射針の先端で、気泡を除去してください。
・(96wellプレート用遠心機をお持ちの場合)1,000 x g, 1分間遠心してください。

②インキュベーション中に培地の水分が蒸発して試薬濃度が変化している。

マイクロプレートの一番外側のウェルは、インキュベーション中の水分蒸発が起こりやすいため、長時間インキュベーションする場合は、一番外側のウェルは測定には利用せず、培地のみを入れて使用してください。

③試薬を添加する際に、最初と最後に添加するウェルの時間差が大きい。

全てのウェルに添加するWorking Solution、Stop Solutionについては、マルチチャンネルピペットのご使用をお勧めします。

④添加した試薬がよく混合されていない。

Lysis Buffer, Working Solution およびStop Solutionを添加した際、プレートミキサーで混合するか、または、プレートの側面を指で軽く叩いて添加した試薬と培地を混和してください。
特に、Lysis Bufferは添加量が少なく、高コントロールの値に影響を与えるため、ご注意ください。
なお、プレートを叩く際は、ウェル中の培地が漏れ出さない程度にしてください。

⑤使用する(マルチチャンネル)ピペットの秤量が正確ではない。

ピペットの秤量が正確か確認してください。

Q

バックグラウンドが高くなりました。原因や対策を教えてください。

A

以下の原因が考えられます。
①培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。
②被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。
(なお、一般的なDMEM、RPMI、F-12等の培地には、通常、還元物質は含まれていません)

Q

細胞数最適化時の高コントロールと低コントロールの吸光度の差が小さい

A

①バックグラウンドが高いために低コントロールの吸光度が高くなっている可能性があります。以下を確認してください。

・培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。
・被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。

②高コントロールに生細胞が残っている可能性があります。

Lysis Bufferがウェル内で均一になり細胞が全て死細胞となるように、Lysis Buffer添加後にプレートを軽く振りLysis Bufferが十分に混ざるようにしてください。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST  細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
PRTR法 第1種指定化学物質
危険・有害
シンボルマーク
細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 
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細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

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    DALGreen – Autophagy Detection

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 

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    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

日本同仁化学死細胞染色色素 -Cellstain®- DAPI 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI Cellstain®– DAPI

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®– DAPI

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

死細胞染色色素

  • 製品コード
    D212  –Cellstain®– DAPI
  • CAS番号
    28718-90-3
  • 化学名
    4′,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride
  • 分子式・分子量
    C16H17Cl2N5=350.25
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 mg ¥5,200 342-07431

【注意】-Cellstain®– DAPIは、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。(Free Dial:0120-489-548)

  • 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 
試験成績書

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マニュアル

  • プロトコル 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI  細胞を染色したい
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 
  • パンフレット 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI  細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) W. Schnedl, A. V. Mikelsaar, M. Breitenbach and O. Dann, "DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading", Hum. Genet., 1977, 36, 167. 
2) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, "An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations", J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224. 
3) F. Otto and K. G. Tsou, "A Comparative Study of DAPI, DIPI, and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains", Stain Technol., 1985, 60, 7. 
4) N. Poulin, A. Harrison and B. Palcic, "Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains", Cytometry, 1994, 16, 227. 
5)M. Kawai, N. Yamaguchi and M. Nasu,"Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process", J. Appl. Microbiol., 1999, 86 (3), 496.

よくある質問

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

 ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。

【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度がEBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

DAPIを核染色に用いたいのですが、どのように使用すればよいのでしょうか?

A

 下記のような使用報告例がございます。 DAPIストック溶液を作成する場合には、水を使用して下さい(PBSには溶解しにくい)。
ただし、水に溶解したものは長期保存には適していません。
長期保存をお考えの際は、溶液の安定性を高めた溶液タイプの製品-Cellstain®– DAPI solution(コード:D523)をご使用下さい。 ご使用の際、ストック溶液を緩衝液もしくは有機溶媒にて目的の濃度に希釈して下さい。

【DAPI を用いた細胞染色の例】
固形腫瘍あるいはcluster を含むsample のDAPI 染色の例(参考文献3)
1) 0.02 %トリプシン – EDTA 処理し、37 ℃で30 分間 incubate 後、1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
2) -20 ℃の50 % methanol (ethanol でも可)にて固定後、1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
3) -20 ℃の30 % methanol にて洗浄後、1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
4) 0.2 M リン酸緩衝液(pH 7.2)にて洗浄後、1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
5) RNase の0.2 M リン酸緩衝液(pH 7.2)溶液 (1 mg/mL ) を細胞106 個あたり0.2 mL を加え、37 ℃にて30 分間 incubate する。
6) 0.2 M リン酸緩衝液(pH 7.2)にて洗浄後、1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
7) 1 μg/mL のDAPI 溶液10 mL 加え、4 ℃にて2時間遮光の上染色する。

【DAPI を用いた細胞染色の例】 Vollenweider らはリンフォカイン活性化キラ-(LAK)細胞の細胞増殖アッセイにおいて、
 DAPI 染色を行ない、蛍光プレ-トリ-ダ-を用いて測定している(参考文献 2)
その時の濃度はストック溶液で0.1 mg/mL の水溶液、使用濃度は1 μg/mL のメタノ-ル溶液を用い、
1 well 当たり 100 μL 使用して蛍光染色している。  

【参考文献】
1) W. Schnedl, A.-V. Mikelsaar, M. Breitenbach, O. Dann, Hum. Genet., 36, 167 – 172 (1977).
2) I. Vollenweider, P. Groscurth, J. Immunol. Methods, 149, 133 (1992)).
3) M. A. Hotz, J. Gong, F. Traganos, Z. Darzynkiwicz, Cytometry, 15, 234 – 244 (1994).
4) N. Poulin, A. Harrison, B. Palcic, Cytometry, 16, 227 – 235 (1994).

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI  死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色~黄緑褐色粉末又は固体で水及び希塩酸に溶ける。
水溶状: 試験適合
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷凍,遮光
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死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI 

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イオン電極用試薬―イオノフォア C14-K22B5 C14-K22B5

11 イオン電極用試薬

C14-K22B5

イオン電極用試薬―イオノフォア C14-K22B5 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―イオノフォア

  • 製品コード
    C391  C14-K22B5
  • 化学名
    4,13-Bis[N-(1-adamantyl)carbamoylacetyl]-8-tetradecyl-1,7,10,16-tetraoxa-4,13-diazacyclooctadecane
  • 分子式・分子量
    C52H88N4O8=897.28
容 量 メーカー希望
小売価格
¥特注品
  • イオン電極用試薬―イオノフォア C14-K22B5 
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  • プロトコル イオン電極用試薬―イオノフォア C14-K22B5  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―イオノフォア C14-K22B5 

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Suzuki, K. Watanabe, Y. Matsumoto, M. Kobayashi, S. Sato, D. Siswanta and H. Hisamoto, "Design and Synthesis of Calcium and Magnesium Ionophores Based on Double-Armed Diazacrown Ether Compounds and Their Application to an Ion-Sensing Component for an Ion-Selective Electrode", Anal. Chem.199567, 324.
2) 小澤覚, 池田貴文, 川崎直哉, 佐々木真一, ダニエルチッテリオ, 山本憲子, 鈴木孝治, 日本化学会第78春季年会予稿集, 2000, 1C231.

取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷凍
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イオン電極用試薬―イオノフォア C14-K22B5 

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日本共立理化学研究所PACKTEST pH-BTB水质测试包

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PACKTEST pH-BTB
PACKTEST pH-BTB
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PACKTEST pH-BTB

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测量次数 50

PACKTEST pH-BTB

类型: WAK-BTB

  • 排水管理
  • 工序和质量控制
  • 设施维护管理
  • 饮用水检验
  • 环境调查
  • 教材与自由研究
  • 农业(施肥管理)
  • 水质事故调查(河川)

PACKTEST是最简单的水质测量仪器。

该产品适用于缓冲性能较弱的清洁水的pH值测量。

测量次数 50

SPECIFICATION 产品规格

测量原理 pH指示剂显色比色法
测量刻度 pH 5.8, 6.0, 6.2, 6.4, 6.6, 6.8, 7.0, 7.2, 7.4, 7.6, 7.8, 8.0以上
测量时间 20 秒
是否可在海水中使用 ×
内容物 软管 50个 (5个装的层压袋 10包), 标准色纸 (盒装) 1个, 使用说明 1张
包装外形 165L × 110W × 65H mm
包装重量 大约 140 g

DOCUMENTS 文件

PACKTEST pH-BTB 使用说明

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PACKTEST 专用杯

日本同仁化学死細胞染色色素 -Cellstain®- DAPI solution 

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死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution Cellstain®- DAPI solution

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®- DAPI solution

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

死細胞染色色素

  • 製品コード
    D523  –Cellstain®- DAPI solution
  • CAS番号
    28718-90-3(DAPI)
  • 化学名
    4′,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride, solution
  • 分子式・分子量
    C16H17Cl2N5=350.25
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 ml ¥6,000 340-07971
  • 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 
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  • プロトコル 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution  細胞を染色したい
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 
  • パンフレット 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution  細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) W. Schnedl, A. V. Mikelsaar, M. Breitenbach and O. Dann, "DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading", Hum. Genet.197736, 167. 
2) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, "An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations", J. Histochem. Cytochem.198028(11), 1224. 
3) F. Otto and K. G. Tsou, "A Comparative Study of DAPI, DIPI, and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains", Stain Technol.198560, 7. 
4) N. Poulin, A. Harrison and B. Palcic, "Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains", Cytometry199416, 227. 
5) M. Kawai, N. Yamaguchi and M. Nasu,"Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process", J. Appl. Microbiol.199986 (3), 496.
6) Y. Saito, T. Chikenji, T. Matsumura, M. Nakano and M. Fujimiya, "Exercise enhances skeletal muscle regeneration by promoting senescence in fibro-adipogenic progenitors", Nat. Commun., 2020, doi:10.1038/s41467-020-14734-x.

よくある質問

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

 ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。
【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。
【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度が
EBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。
【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。
【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを
利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。
【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 

 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

DAPIを核染色に用いたいのですが、どのように使用すればよいのでしょうか?

A

下記のような使用報告例がございます。
【DAPI を用いた細胞染色の例】
固形腫瘍あるいはcluster を含むsample のDAPI 染色の例(参考文献3)
1) 0.02 %トリプシン – EDTA 処理し、37 ℃で30 分間 incubate 後、
  1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
2) -20 ℃の50 % methanol (ethanol でも可)にて固定後、
  1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
3) -20 ℃の30 % methanol にて洗浄後、1,500 rpm で
  5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
4) 0.2 M リン酸緩衝液(pH 7.2)にて洗浄後、1,500 rpm で
  5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
5) RNase の0.2 M リン酸緩衝液(pH 7.2)溶液 (1 mg/mL ) を
  細胞10^6 個あたり0.2 mL を加え、37 ℃にて30 分間 incubate する。
6) 0.2 M リン酸緩衝液(pH 7.2)にて洗浄後、1,500 rpm で5分間遠心分離を行ない、上清をすてる。
7) 1 μg/mL のDAPI 溶液10 mL 加え、4 ℃にて2時間遮光の上染色する。
【DAPI を用いた細胞染色の例】
Vollenweider らはリンフォカイン活性化キラ-(LAK)細胞の細胞増殖アッセイにおいて、
 DAPI 染色を行ない、蛍光プレ-トリ-ダ-を用いて測定している(参考文献 2)。
その時の濃度はストック溶液で0.1 mg/mL の水溶液、使用濃度は1 μg/mL のメタノ-ル溶液を用い、
1 well 当たり 100μL 使用して蛍光染色している。
 
 
【参考文献】
1) W. Schnedl, A.-V. Mikelsaar, M. Breitenbach, O. Dann, Hum. Genet., 36, 167 – 172 (1977).
2) I. Vollenweider, P. Groscurth, J. Immunol. Methods, 149, 133 (1992).
3) M. A. Hotz, J. Gong, F. Traganos, Z. Darzynkiwicz, Cytometry, 15, 234 – 244 (1994).
4) N. Poulin, A. Harrison, B. Palcic, Cytometry, 16, 227 – 235 (1994).
5) C. Souchier, M. French, M. Benchaib, R. Catallo, P. A. Bryon, Cytometry, 20, 203 – 209 (1995).

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution  死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 

取扱条件

規格
性状: 本品は、微黄色~黄色液体である。
含量: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
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死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- DAPI solution 

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日本同仁化学細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

生細胞測定 Cell Counting Kit-8と、死細胞測定 Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (各500 tests) のセット

  • 製品コード
    CK17  Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
500 tests ¥30,800 346-09271
キット内容
500 tests Cell Counting Kit-8
[500 回用]
・WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液

Cytotoxicity lDH Assay Kit-WST
[500 tests]
・Dye Mixture      
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution

5ml x1

x1
55 ml x1
5.5 ml x1
27.5 ml x1

  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 
試験成績書

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マニュアル

  • 取扱説明書 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit  日本語
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 
  • プロトコル 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit  生細胞数を測りたい(吸光測定)
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

技術情報

2つの指標で評価する理由

細胞傷害性を確認する際、生細胞のみ又は死細胞のみを指標とした評価では、データの信頼性が十分でない場合もあることから、測定原理の異なる複数の指標で評価することで実験の裏付けを行うケースが増えています。

1つの指標(生細胞)だけでの評価では…
生細胞:代謝活性(CCK-8、MTT、MTS、XTT等)

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

2つの指標(生細胞と死細胞)で評価すると…
生細胞:代謝活性(CCK-8、MTT、MTS、XTT等)
死細胞:細胞膜損傷(LDH Assay Kit)
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

参考文献

参考文献を表示する

1) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.

取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
PRTR法 第1種指定化学物質
危険・有害
シンボルマーク
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 
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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

関連製品

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    Cell Counting Kit-8

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    細胞毒性測定キット

    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

    オートファジー(オートリソソーム)の検出試薬

    DALGreen – Autophagy Detection

  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

日本同仁化学イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4 

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イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4 Dibenzyl-14-crown-4

11 イオン電極用試薬

Dibenzyl-14-crown-4

イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―イオノフォア

  • 製品コード
    D043  Dibenzyl-14-crown-4
  • CAS番号
    106868-21-7
  • 化学名
    6,6-Dibenzyl-1,4,8,11-tetraoxacyclotetradecane
  • 分子式・分子量
    C24H32O4=384.51
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
50 mg ¥26,400 349-05621
  • イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4 
試験成績書

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  • ご購入方法
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マニュアル

  • プロトコル イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4 

技術情報

溶解例

10 mg/mL(アセトニトリル)、 10 mg/mL(クロロホルム)

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Kimura, H. Oishi, T. Miura and T. Shono, "Lithium Ion Selective Electrodes Based on Crown Ethers for Serum Lithium Assay", Anal. Chem., 1987, 59, 2331.
2) K. Kimura, H. Yano, S. Kitazawa and T. Shono, "Synthesis and Selectivity for Lithium of Lipophilic 14-Crowm-4 Derivatives Bearing Bulky Substituents or an Additional Binding Site in the Side Arm", J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 1986, 1945.
3) 坂本英文, 三浦勤, 田中稔, 庄野利之, "脂溶性置換基を持つ14-クラウン-4誘導体をイオノフォアとするリチウムイオン選択性電極", 分析化学, 1990, 39, 779.
4) 喜納兼勇, "リチウムセンサー", 臨床検査, 1990, 34, 1583.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色結晶性粉末でアセトニトリル、クロロホルムに溶ける。
クロロホルム溶状: 試験適合
純度(HPLC): 98.0% 以上
融点: 97~103℃試験適合
IRスペクトル: 試験適合
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
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イオン電極用試薬―イオノフォア Dibenzyl-14-crown-4 

関連製品

日本共立理化学研究所PACKTEST 氯(200)水质测试包

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PACKTEST 氯(200)
PACKTEST 氯(200)

PACKTEST 氯(200)

PACKTEST 氯(200)

PACKTEST 氯(200)

测量次数 40

PACKTEST 氯(200)

类型: WAK-Cl(200)

  • 工序和质量控制
  • 设施维护管理
  • 饮用水检验
  • 环境调查
  • 水质事故调查(河川)

PACKTEST是最简单的水质测量仪器。

该产品可方便地测量测试水中的氯离子(Cl)。

在将测试水吸入管子之前,必须先使用盒子里的K-1试剂进行操作。标准色纸上的用法也在“使用说明”中列出。有关更多信息,请参见使用说明。

测量次数 40

SPECIFICATION 产品规格

测量原理 硝酸银比色法
测量刻度 100以下, 約150, 200以上 mg/L
测量时间 10 秒
是否可在海水中使用 由于海水中含有大量的氯离子,因此需要对检测水进行稀释。
内容物 软管 40个 (5个装的层压袋 8包), K-1试剂 (液体) 1瓶, 专用杯 2个, 使用说明(附带标准色纸)1套
包装外形 165L × 110W × 65H mm
包装重量 大约 140 g

DOCUMENTS 文件

PACKTEST 氯(200) 使用说明

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PACKTEST 氯(200)

PACKTEST 专用杯

日本同仁化学核染色用色素 -Cellstain®- Hoechst 33258 solution 

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核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution Cellstain®– Hoechst 33258 solution

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®– Hoechst 33258 solution

核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

核染色用色素

  • 製品コード
    H341  –Cellstain®– Hoechst 33258 solution
  • CAS番号
    23491-45-4(Hoechst 33258)
  • 化学名
    2′-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride, solution
  • 分子式・分子量
    C25H27Cl3N6O=533.88
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 ml ¥5,200 343-07961
  • 核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • プロトコル 核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution  細胞を染色したい
    核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 
  • パンフレット 核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution  細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 

参考文献

参考文献を表示する

1) M. J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, "Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry", J. Cell Physiol.1980102(2), 175.
2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H. L. Roelen, van J. H. Boo and A. H. Wang, "Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex", Biochemistry199231(47), 11823.
3) T. Ohara and T. Tsuge, "FoSTUA, Encoding a Basic Helix-Loop-Helix Protein, Differentially Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores, Macroconidia, Microconidia, and Chlamydospores, in the Fungal Plant Pathogen Fusarium oxysporum", Eukaryot. Cell20043, 1412.

よくある質問

Q

Hoechst 33258 ,Hoechst 33342 solutionの励起波長、蛍光波長とこれらの違いについて教えて下さい。

A

波長は以下の通りです。
Hoechst33342 Ex:350 nm Em:461 nm
Hoechst33258 Ex:352 nm Em:461 nm

基本的な使用方法は両方とも同じです。
弊社の製品は水溶液になっておりますので、
ご希望の濃度の希釈し、添加して下さい。

この二つの違いですが、基本的にはAdenine-Thymidine部に特異的に結合する薬品です。
生細胞の膜も通過し、生細胞のDNAとも結合します。
膜の透過率はHoechst 33342の方が若干高いです。
Hoechst33258はdsDNA selectivのようです。

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。
【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度が
EBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを
利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

Hoechst33258の使用方法を教えてください。

A

 色々な使い方がありますが、一例として形態観察の例を示します。
アポトーシス細胞の核変化(クロマチン凝縮、断片化)を手軽に観察する方法として用いられます。

<試薬>

・細胞固定液:1%グルタルアルデヒド/PBS(-)

・蛍光染色液:1 mM Hoechst33258/PBS(-)
   *同仁の製品は[1 mg/mL]になっています(約1.87 mmol/L)

<操作方法>

1.約1X106個の細胞を含む細胞培養液を400 Xg,5 min遠心し、上清を捨てる。

2. 細胞固定液を100 μL加え、ピペッティング等により混和する。

3. 室温で30 min静置する。

4. 400Xg,5 min遠心し、上清を捨てる。

  PBS(-)を1 mL加え、ピペッティング等により混和した後、400Xg、5 min遠心し上清を捨てる。

  (*このときグルタルアルデヒドをよく洗浄除去する。退色の原因になります)

5. PBS(-)を20 μL加え、混和した後、蛍光染色液を4 μL加え混合する。

6. スライドガラス上に(5)の細胞液を1滴落し、カバーガラスをのせ、端を押さえる。

7. 蛍光顕微鏡下で観察する。

*細胞工学別冊 実験プロトコールシリーズ「アポトーシス実験プロトコール」田沼靖一監修より

核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution  核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色液体である。
含量: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
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核染色用色素 -Cellstain&reg;- Hoechst 33258 solution 

関連製品

日本同仁化学イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca 

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イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca HDOPP-Ca

11 イオン電極用試薬

HDOPP-Ca

イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―イオノフォア

  • 製品コード
    H003  HDOPP-Ca
  • CAS番号
    52813-66-8
  • 化学名
    Bis(4-n-octylphenyl)phosphate, calcium salt
  • 分子式・分子量
    C56H84CaO8P2=987.29
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 g ¥Request 340-04931
  • イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca 
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マニュアル

  • プロトコル イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca 

技術情報

溶解例

2 mg/10 mL(熱テトラヒドロフラン)

参考文献

参考文献を表示する

1) J. W. Ross, "Calcium-Selective Electrode with Liquid Ion Exchanger", Science1967156, 1378. 
2) J. Ruzicka, E. H. Hansen and J. Chr. Tjell, "Selectrode – The Universal Ion-selective Electrode Part VI. The Calcium(II) Selectrode Employing a New Ionexchanger in a Nonporous Membrane and a Solid-state Reference System", Anal. Chim. Acta, 1973, 67, 155. 
3) H. M. Brown, J. P. Pemberton and J. D. Owen, "A Calcium-sensitive Microelectrode Suitable for Intracellular Measurement of Calcium(II) Activity", Anal. Chim. Acta197685, 261.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色粉末である。
テトラヒドロフラン溶状: 試験適合
モル吸光係数: 3,600 以上(270 nm付近)
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
SDSダウンロード
イオン電極用試薬―イオノフォア HDOPP-Ca 

関連製品

日本同仁化学老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal 

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老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化

老化細胞検出キット

  • 製品コード
    SG03  Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
10 assays ¥40,200 347-09181
キット内容
10 assays [10 assays: 35 mm dish]
・SPiDER-βGal
・Bafilomycin A1
x 1
x 1

  • 老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
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  • ご購入方法
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マニュアル

  • 取扱説明書 老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal  日本語
    老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
  • 取扱説明書 老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal  English
    老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
  • プロトコル 老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal  老化細胞を検出したい
    老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

技術情報

技術情報の目次

  • 原理
  • 蛍光特性(β-galactosidaseと反応後のSPiDER-βGal)
  • 本キットを使用した論文
  • キットの使用手順
  • 特長①.生細胞も固定化細胞も適用できる
  • 特長②.定量が容易にできる
  • 一般的な老化細胞マーカー
  • 異なる老化マーカーとの共染色
  • 組織サンプル中のSA-β-gal検出
  • T細胞(浮遊細胞)におけるSA-β-gal検出
  • 細胞老化と細胞周期との関連性
  • 共焦点定量イメージサイトメーターによる定量解析

細胞老化と細胞周期との関連性

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、本製品で細胞老化、Cell Cycle Assay Solution Blue (製品コード:C549)/ Deep Red(製品コード:C548)でA549 細胞における細胞周期の変化と、JC-1 MitoMP Detection Kit (製品コード:MT09)でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal  老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

技術や使用製品に関する補足

  • 老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

    細胞周期測定試薬

    Cell Cycle Assay Solution Blue

  • 老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置 引用(リンク)
1)

細胞(HEK)
遺伝子(LacZ)

蛍光顕微鏡
フローサイトメーター
T. Doura, M. Kamiya, F. Obata, Y. Yamaguchi, T. Y. Hiyama, T. Matsuda, A. Fukamizu, M. Noda, M. Miura, Y. Urano, "Detection of LacZ-Positive Cells in Living Tissue with Single-Cell Resolution.", Angew Chem Int Ed Engl., 2016, 55, 33
2) 組織(マウス脂肪) 蛍光顕微鏡 T. Sugizaki, S. Zhu, G. Guo, A. Matsumoto, J. Zhao, M. Endo, H. Horiguchi, J. Morinaga, Z. Tian, T. Kadomatsu, K. Miyata, H. Itoh & Y. Oike, "Treatment of diabetic mice with the SGLT2 inhibitor TA-1887 antagonizes diabetic cachexia and decreases mortality", Nature Partner Journal:Aging and Mechanisms of Disease., 2017, doi:10.1038/s41514-017-0012-0.
3)

細胞
(HSP27-knockdown)
タンパク質
(Ki67、cyclin B1)

蛍光顕微鏡 A. Park, I. Tsunoda and O. Yoshie, "Heat shock protein 27 promotes cell cycle progression by down-regulating E2F transcription factor 4 and retinoblastoma family protein p130", J. Biol. Chem.2018, doi: 10.1074/jbc.RA118.003310 .
4) 細胞(A549) 蛍光顕微鏡
フローサイトメーター
R. Tanino, Y. Tsubata, N. Harashima, M. Harada and T. Isobe, "Novel drug-resistance mechanisms of pemetrexed-treated non-small cell lung cancer", Oncotarget., 2018, 9, (24), 16807.
5) 細胞(NHDF) 蛍光顕微鏡 Y. Kitahiro, A. Koike, A. Sonoki, M. Muto, K. Ozaki and M. Shibano. , "Anti-inflammatory activities of Ophiopogonis Radix on hydrogen peroxide-induced cellular senescence of normal human dermal fibroblasts.", J Nat Med., 2018, 72, 905.
6)

組織
(老齢マウス腸上皮オルガノイド)

蛍光顕微鏡 R. Uchida, Y. Saito, K. Nogami, Y. Kajiyama, Y. Suzuki, Y. Kawase, T. Nakaoka, T. Muramatsu, M. Kimura and H. Saito, "Epigenetic silencing of Lgr5 induces senescence of intestinal epithelial organoids during the process of aging", NPJ Aging Mech Dis., 2018, doi:10.1038/s41514-018-0031-5.
7)

組織(腎臓凍結切片)

蛍光顕微鏡 S. R. Kim, A. Eirin, X. Zhang, A. Lerman and L. O. Lerman, "Mitochondrial Protection Partly Mitigates Kidney Cellular Senescence in Swine Atherosclerotic Renal Artery Stenosis.", Cell. Physiol. Biochem., 2019, 52, 617.
8)

細胞(HN6, HN12, HN13)

フローサイトメーター Liana P. Webber, Veronica Q. Yujra, Pablo A. Vargas, Manoela D. Martins. Cristiane H. Squarize, Rogerio M. Castilho, "Interference with the bromodomain epigenome readers drives p21 expression and tumor senescence", Cancer Letters., 2019, doi.org/10.1016/j.canlet.2019.06.019.
9)

細胞(UE7T-13)

フローサイトメーター H. Ise, K. Matsunaga, M. Shinohara and Y. Sakai, Improved Isolation of Mesenchymal Stem Cells Based on Interactions between N-Acetylglucosamine-Bearing Polymers and Cell-Surface Vimentin ", Stem Cells Int., 2019, 4341286, 13.
10)

細胞(マウス角膜間質)

フローサイトメーター X. Wang, M. Qu, J. Li, P. Danielson, L. Yang and Q. Zhou, Induction of Fibroblast Senescence During Mouse Corneal Wound Healing.", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2019, 60, (10), 3669.
11)

細胞(VZ/SVZ)

フローサイトメーター  Y. Nakatani, H. Kiyonari and T. Kondo, Ecrg4 deficiency extends the replicative capacity of neural stem cells in a Foxg1-dependent manner.", Development., 2019, 146, (4), 18.
12)

細胞(HaCaT, HEK001)

蛍光顕微鏡 Y. S. Ryu, K. A. Kang, M. J. Piao, M. J. Ahn, J. M. Yi, G. Bossis, Y. M. Hyun, C. O. Park and J. W. Hyun, Particulate matter-induced senescence of skin keratinocytes involves oxidative stress-dependent epigenetic modifications", Exp. Mol. Med., 2019, 51, 108.
13)

細胞(HT1080)

蛍光顕微鏡 E. M. Angela Ibler, E. Mohamed, L. N. Kathryn, A. B. Natalia, F. E. K. Sherif and H. Daniel, Typhoid toxin exhausts the RPA response to DNA replication stress driving senescence and Salmonella infection', Nat Commun., 2019, 10, 4040.
14) – (Review) フローサイトメーター  B.L. Torres, A. Estepa-Fernandez, M. Rovira, M. Oraez, M. Serrano, R. Martinez-Manez and F. Sancenon,"The chemistry of senescence.", The chemistry of senescence., 2019, (3), 426-411
15)

細胞(HepG2)

蛍光顕微鏡 三谷塁一, "肝臓のミトコンドリア活性化に及ぼす大豆イソフラボンの効果と
その分子機構に関する研究", 大豆たん白質研究, 2019, 21
16)

細胞(PC12)

蛍光顕微鏡 N. Wang, H. Wang, L. Li, Y. Li and R. Zhang, "β-Asarone Inhibits Amyloid-β by Promoting Autophagy in a Cell Model of Alzheimer's Disease.", Front Pharmacol., 2020, 10, 1529
17)

細胞(A2780)

フローサイトメーター Z. Wang, J. Gao, Y. Ohno, H. Liu and C. Xu, "Rosiglitazone ameliorates senescence and promotes apoptosis in ovarian cancer induced by olaparib.", Cancer Chemother Pharmacol., 2020.
18)

組織
(マウス腎臓凍結切片)

蛍光顕微鏡
フローサイトメーター
J. H. Cho, E. Kim, Y. Son, D. Lee, Y. S. Park, J. H. Choi, K. Cho, K. Kwon and J. Kim, "CD9 Induces Cellular Senescence and Aggravates Atherosclerotic Plaque Formation.", Cell Death Differ.2020, doi: 10.1038/s41418-020-0537-9
19)

細胞(T cell)

フローサイトメーター S. Yoshida, H. Nakagami, H. Hayashi, Y. Ikeda, J. Sun, A. Tenma, H. Tomioka, T. Kaawano, M. Shimamura, R. Morishita and H. Rakugi, "The CD153 vaccine is a senotherapeutic option for preventing the accumulation of senescent T cells in mice.", Nat. Commun., 2020, 11, (2482), doi:10.1038/s41467-020-16347-w
20)

細胞(PC12)

蛍光顕微鏡 N. Wang, H. Wang, L. Li, Y. Li and R. Zhang, "β-Asarone Inhibits Amyloid-β by Promoting Autophagy in a Cell Model of Alzheimer's Disease.", Front Pharmacol., 2020, 10, 1529
21)

細胞(ARPE-19)

蛍光顕微鏡 T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091
22) 細胞 (ゼブラフィッシュの上皮細胞) 蛍光顕微鏡 Y. Haraoka, Y. Akieda, Y. Nagai, C. Mogi and T. Ishitani, "Zebrafish imaging reveals TP53 mutation switching oncogene-induced senescence from suppressor to driver in primary tumorigenesis", Nat. Commun.2022, doi:10.1038/s41467-022-29061-6.

よくある質問

Q

1キット当りの使用回数の目安は?

A

目安となる使用回数については、下記の容器毎の数量をご参考ください。

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

※1ウェル当りに添加する染色溶液の量によって上記の数量は変わります。
  使用する容器と必要な1ウェル当りの染色溶液量を予め確認の上、ご使用ください。

Q

Bafilomycin A1 を添加する理由を教えて下さい。

A

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

多くの細胞には内在性のβ-ガラクトシダーゼの存在が知られていますが、SPiDER-βGalは、内在性のβ-ガラクトシダーゼと老化マーカーであるSA-β-Galともに反応するため、老化が認められていない細胞でも、バックグラウンドが高くなり、SA-β-Galの検出に支障が出てきます。
Bafilomycin A1は、リソソーム中のATPase活性を阻害し、リソソーム中のpHを酸性から中性付近に変化させますが、この作用により内在性β-ガラクトシダーゼの活性が低下します。そのため、SPiDER-βGalを添加する前にBafilomycin A1で細胞を処理することで、SPiDER-βGalはSA-β-Galと反応して老化細胞を蛍光染色することができます。

左図ではBafilomycin A1の添加有無によるSA-β-Gal検出の違いを示しています。

なお、Bafilomycin A1は、オートファジー阻害剤としての利用も知られています。ご利用の際は、実験系に支障があるかご検討の上、支障が有る場合は、固定化細胞の利用をお勧めします。固定化細胞を用いる場合は、バッファーで細胞内pHをコントロールするため、Bafilomycin A1 は使用しません。取扱説明書に記載された手順に従って染色することができます。

Q

DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか?

A

SPiDER-βGal DMSO stock solution及びBafilomycin A1 DMSO stock solution調製後は、-20℃保存した場合に1か月間安定であることを確認しています。

Q

Working solutionは、どのくらい安定ですか?

A

SPiDER-βGal working solution及びBafilomycin A1 working solutionは保存できないため、用時調製して下さい。

Q

老化細胞を蛍光観察する際の注意点はありますか?

A

細胞老化が進むと細胞内にリポフスチンと呼ばれる不溶性物質が蓄積してきます。リポフスチンは自家蛍光を発するため蛍光観察時にバックグラウンドとして影響することがあります。その場合、老化細胞中のSA-β-gal活性を正確に評価するために、SPiDER-βGalを添加しない試料もご用意いただき確認することをお勧めします。

○フローサイトメーターの場合
・「老化細胞」および「老化していない細胞」を用いて、各々①②の平均蛍光強度(MFI)を測定してください。
   ①SPiDER-βGalを添加した細胞
   ②SPiDER-βGalを添加していない細胞(バックグラウンド)

・「①の平均蛍光強度」から「②の平均蛍光強度」を差し引いてください。
 バックグラウンドを差し引いたSA-β-gal由来の蛍光強度をSA-β-gal活性の指標とします。
   a:SA-β-gal活性(老化細胞)      = ①の平均蛍光強度 - ②の平均蛍光強度
   b:SA-β-gal活性(老化していない細胞) = ①の平均蛍光強度 - ②の平均蛍光強度

・上記の aおよびb の値を比較することで、SA-β-gal活性として評価してください。
   また、上記のaからbを差し引くことで細胞老化に伴うSA-β-gal活性の変化を確認できます。

○蛍光顕微鏡の場合
・初めにSPiDER-βGalを添加していない老化細胞を用いて蛍光観察してください。
・リポフスチン由来の蛍光像(バックグラウンド)が影響を与えない程度に感度(gainなど)を調整してください。
・その後、同じ撮影条件でSPiDER-βGalを添加した細胞や老化していない細胞の蛍光観察を行い評価してください。

Q

細胞を固定化した後に、SA-β-galは染色できますか?

A

可能です。固定化した場合、Bafilomycin A1を用いた細胞の前処理は必要ありませんが、pH6.0に調整したMcIlvain bufferを別途準備して頂く必要があります。詳細は取扱説明書をご覧ください。

Q

固定化細胞をフローサイトメーターを用いて検出するプロトコルを教えて下さい。

A

下記のプロトコルを参照ください。

(1) 細胞を35 mmディッシュに播種し、37℃、5% CO2インキュベーターで一晩培養する。
(2) 培地を吸引除去し、HBSS 2 mlで1回洗浄する。
(3) トリプシンで細胞を剥がし、培地500 μlで回収する。
(4) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(5) 2% PFA/PBS 100 μlに懸濁し、室温で5分間固定する。
(6) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(7) HBSS 500 μLに懸濁し、300×gで5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(8) SPiDER-βGal working solution(固定化細胞用) 500 μlを加え、37℃で30分間インキュベートする。
   ※pHの変動を抑えるため、5% CO2インキュベーターは使用しない。
(9) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(10) HBSS 500 μlに懸濁し、300×gで5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(11) HBSS 500 μlを加えて細胞を回収し、フローサイトメーターにて解析する。

Q

細胞を固定化後にSA-β-gal検出および免疫染色はできますか?

A

はい、染色は可能ですが、細胞を固定化するとSA-β-galが低下する可能性があります。 (下記の※2に注意事項を記載)
以下の実験例を参照しご検討ください。

WI-38細胞を固定化後に、SA-β-gal検出およびγ-H2AX(DNA損傷マーカー)の免疫染色を行った。

<実験操作>

(1) WI-38細胞を35 mm dishに播種し、37℃、5% CO2インキュベーターで一晩培養した。
(2) 培養上清を除き、4% Paraformaldehyde/PBS溶液2 mlを細胞に添加し、室温で3分間インキュベートした※1
(3) PBS 2 mlで細胞を3回洗浄した。
(4) SPiDER-βGal working solution ※2 2 mlを添加し、37℃で30分間インキュベートした※3
(5) PBS 2 mlで細胞を2回洗浄した。
(6) 0.1% Triton X-100/PBS 2 mlを細胞へ添加し、室温で30分間インキュベートした。
(7) PBS 2 mlで2回洗浄した。
(8) 1% BSA/PBS溶液2 mlを細胞へ添加し、室温で1時間インキュベートした。
(9) 抗γ-H2AX IgG (マウス由来)を1% BSA/PBS溶液にて希釈後、細胞に添加し4℃で一晩インキュベートした。
(10) PBS 2 mlで細胞を3回洗浄した。
(11) 抗マウスIgG(Cy5標識)を1% BSA/PBSで希釈後、細胞に添加し室温で1時間インキュベートした。
(12) 上清を除き、PBS 2 mlで細胞を2回洗浄し蛍光顕微鏡下で観察した。
※1 固定化時間を長くすると、SA-β-gal活性が低下します。
※2 細胞の固定化操作によりSA-β-gal活性が低下する可能性があります。 もしSA-β-gal評価時に十分な蛍光強度が得られない場合は、SPiDER-βGal DMSO stock solution を500-1000倍に希釈しご使用ください。通常はSPiDER-βGal DMSO stock solutionをMcIlvaine buffer(pH 6.0)にて2,000倍の希釈を推奨。
希釈倍率の異なるSPiDER-βGal working solutionの結果をFig.1に示す。
※3 インキュベートの際は、5% CO2インキュベーターでは行わないこと。5% CO2インキュベーター内に固定化した細胞をおくと、バッファーが酸性になることで内在性のβ-galactosidase活性が上昇することが考えられる。結果として、バックグラウンドが上昇し、老化細胞と若い細胞のSA-β-gal活性の差が見えにくくなる。

 

<実験データ>

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
図1 免染前後におけるSPiDER-βGal染色の蛍光強度変化

免疫染色の前後でSPiDER-βGalの蛍光強度を比較すると、固定化を行う免疫染色の過程でSPiDER-βGalの蛍光強度が低下していることを確認した。
 

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 
図2 希釈倍率の異なるSPiDER-βGalによる染色例(免疫染色後)
 赤: SPiDER-βGal、青: γ-H2AX <露光時間: 1.5 sec>

SPiDER-βGal working solutionの希釈倍率を2000倍から666倍に変更することで、免疫染色(固定化)により低下したSPiDER-βGalの蛍光強度が免疫染色前と同程度の強度を示すことを確認した。

Q

染色後の蛍光が弱くて確認できないのですが、対策を教えてください。

A

下記の3点についてご確認またはご検討ください。

①ご使用のフィルターが試薬の蛍光特性に合致している。
 <推奨フィルター>
  ・蛍光顕微鏡: 励起(500-540 nm), 蛍光(530-570 nm)
  ・フローサイトメーター: 励起(488 nm), 蛍光(500-540 nm)
 
②各working solutionは用時調製したものを使用する。

③染色時間を長くする。
 SPiDER-βGal working solution添加後、30分間のインキュベーションで蛍光が確認できない場合は、インキュベーション時間を45-60分間を目安にご検討ください。

Q

SA-β-Gal発現細胞を染色後、細胞は固定化できますか?

A

可能です。4%パラホルムアルデヒドを用いて固定化することを推奨します。

Q

培地中の血清やフェノールレッドは検出に影響しますか?

A

培地中の血清およびフェノールレッドは、SA-β-galの検出には影響しません。

Q

老化細胞とコントロール細胞で蛍光強度に差がない場合、何を確認したら良いですか?

A

STEP1:顕微鏡の観察条件を最適化してください。
STEP2:観察条件を最適化しても解決しない場合、染色条件の最適化を行ってください。

—————————————————————————
STEP1<顕微鏡の観察条件を最適化>

コントロール細胞の蛍光と老化細胞の蛍光に差が見られない場合下記をご確認ください。

・コントロール細胞を観察し蛍光が僅かに確認できる条件までGain、レーザー強度を下げる、または露光時間を短くする。
(共焦点顕微鏡:Gain、レーザー強度の調整 落射型顕微鏡:露光時間の調整)

・老化細胞の蛍光を観察し、コントロール細胞との蛍光の差を確認する。

・蛍光の差がみられない場合はSTEP2を確認する。

※観察する部分がガラスボトムシャーレの容器をお使いください。

顕微鏡観察条件とコントロールおよび老化細胞の蛍光強度の関係

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

—————————————————————————
STEP2<染色条件の最適化>

細胞によっては、SPiDERの染色時間もしくは濃度の検討が必要な場合がございます。
以下を目安に最適条件をご検討ください。
染色時間:10分~60分
染色濃度:取扱説明書に記載の濃度の1/2量~2倍量

※観察する細胞数が少ないと感度が得られない場合がございます。
 必要に応じて、細胞数の最適化を行ってください。

染色条件とコントロールおよび老化細胞の蛍光強度の関係

老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal 

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取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵
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PACKTEST 氯(300)
PACKTEST 氯(300)

PACKTEST 氯(300)

PACKTEST 氯(300)

PACKTEST 氯(300)

测量次数 40

PACKTEST 氯(300)

类型: WAK-Cl(300)

  • 工序和质量控制
  • 设施维护管理
  • 饮用水检验
  • 环境调查
  • 水质事故调查(河川)

PACKTEST是最简单的水质测量仪器。

该产品可方便地测量测试水中的氯离子(Cl)。

在将测试水吸入管子之前,必须先使用盒子里的K-1试剂进行操作。标准色纸上的用法也在“使用说明”中列出。有关更多信息,请参见使用说明。

测量次数 40

SPECIFICATION 产品规格

测量原理 硝酸银比色法
测量刻度 200以下, 約250, 300以上 mg/L
测量时间 10 秒
是否可在海水中使用 由于海水中含有大量的氯离子,因此需要对检测水进行稀释。
内容物 软管 40个 (5个装的层压袋 8包), K-1试剂 (液体) 1瓶, 专用杯 2个, 使用说明(附带标准色纸)1套
包装外形 165L × 110W × 65H mm
包装重量 大约 140 g

DOCUMENTS 文件

PACKTEST 氯(300) 使用说明

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日本同仁化学老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal 

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老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化

老化細胞検出キット(マイクロプレート用)

  • 製品コード
    SG05  Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 tests ¥11,400 345-09501
100 tests ¥33,000 341-09503
キット内容
20 tests SPiDER-βGal
lysis Buffer
Assay Buffer
Stop Solution
×1
40 ml×1
1.5 ml×1
3 ml×1
100 tests SPiDER-βGal
lysis Buffer
Assay Buffer
Stop Solution
×5
100 ml×2
7.5 ml×1
15 ml×1

  • 老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 
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マニュアル

  • 取扱説明書 老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal  日本語
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 
  • 取扱説明書 老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal  English
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 
  • 細胞数補正キットとの併用プロトコル 老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal  日本語
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 
  • Protocol for a Combined Analysis 老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal  with Cell Count Normalization Kit [English]
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 

技術情報

簡便に老化細胞を数値化

準備した細胞をキット同梱のBuffer で溶解し、蛍光基質(SPiDER-βGal)を添加するだけで、SA-β-gal の活性に応じた蛍光強度が得られます。
なおディッシュ(100 mm dish)等で細胞を準備した場合でも、細胞溶解後に96 ウェルプレートに移して頂くだけで評価頂けます。
老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 

実験例:薬剤添加による評価

ROS発生剤であるDoxorubicinを添加し培養したWI-38 細胞を用い、本キットによるプレートアッセイを行いました。結果、Doxorubicinを添加した細胞では、 SA-β-gal の亢進が確認されました。

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 
<検出条件>
Ex. 535 nm / Em. 580 nm

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点:細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正(ノーマライゼーション)が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットは、
こちらから

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 

 

 

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用(リンク)
1 細胞
(MRC-5)
プレートリーダー Y. Takenaka, I. Inoue, T. Nakano, M. Ikeda and Y. Kakinuma, "Prolonged disturbance of proteostasis induces cellular senescence via temporal mitochondrial dysfunction and subsequent mitochondrial accumulation in human fibroblasts", 2021, doi:10.1111/febs.16249.
2 細胞
(ヒト網膜色素上皮細胞)
プレートリーダー H. Yamamoto-Imoto, S. Minami, T. Shioda, Y. Yamashita, S. Sakai, S. Maeda, T. Yamamoto, S. Oki, M. Takashima, T. Yamamuro, K. Yanagawa, R. Edahiro, M. Iwatani, M. So, A. Tokumura, T. Abe, R. Imamura, N. Nonomura, Y. Okada, D. E. Ayer, H. Ogawa, E. Hara, Y. Takabatake, Y. Isaka, S. Nakamura and T. Yoshimori, "Age-associated decline of MondoA drives cellular senescence through impaired autophagy and mitochondrial homeostasis", Cell Rep.2022, doi:10.1016/j.celrep.2022.110444.

よくある質問

Q

1キットあたりの測定可能なサンプル数を教えてください。

A

測定可能なサンプル数の目安は以下の通りです。

  20 tests 100 tests
測定可能なwell数 96 wellプレート
20 well分
96 wellプレート
1 枚分
測定可能なサンプル数
(n=3 にて測定した場合)
6 サンプル 30 サンプル

Q

96 wellプレートで細胞を老化誘導をして測定することは可能ですか?

A

老化誘導はディッシュ等で行い、その後、細胞を96 wellプレートに移して測定することを推奨します。
同一プレート内に老化誘導しない細胞(コントロール)と老化誘導する細胞(サンプル)を配置して比較を行いますが、96 wellプレートで老化誘導を行うと、(老化誘導の日数に依りますが)コントロール細胞は増殖しすぎてコンフルエントの状態を招く可能性があります。
また、コンフルエントを回避するために予め細胞数を少なく播種した場合にも、老化誘導処理した老化細胞はプレートアッセイに必要な感度(細胞数)が得られない可能性があります。

Q

96 wellプレートに播種する細胞数の目安はどれくらいですか?

A

至適細胞数は細胞種によって異なります。
弊社では、1×104 cellsの WI-38細胞を各 wellに播種し、実験した実績がございます。

詳しい操作については、取扱説明書内の「実験例2」をご参照ください。
 

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal  老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 

取扱条件

取扱条件
1.化審法, 2.保存方法:冷蔵,遮光
PRTR法 第1種指定化学物質
危険・有害
シンボルマーク
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11 イオン電極用試薬

TTD-14-crown-4

イオン電極用試薬―イオノフォア TTD-14-crown-4 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―イオノフォア

  • 製品コード
    T302  TTD-14-crown-4
  • CAS番号
    151460-00-3
  • 化学名
    2,2,3,3-Tetramethyl-9-tetradecyl-1,4,8,11-tetraoxacyclotetradecane
  • 分子式・分子量
    C28H56O4=456.74
容 量 メーカー希望
小売価格
¥特注品
  • イオン電極用試薬―イオノフォア TTD-14-crown-4 
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マニュアル

  • プロトコル イオン電極用試薬―イオノフォア TTD-14-crown-4  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―イオノフォア TTD-14-crown-4 

技術情報

溶解例

10 mg/mL(クロロホルム)

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) K. Suzuki, K.Tohda, H. Aruga, M. Matsuzoe, H. Inoue and T. Shirai, "Ion-Selective Electrode Based on Natural Carboxylic Polyether Antibiotics", Anal. Chem., 1988, 60, 1714.
2) K. Suzuki, H. Yamada, K. Sato, K. Watanabe, H. Hisamoto, Y. Tobe and K. Kobiro, "Design and Synthesis of Highly Selective Ionophores For Lithium Ion Based on 14-Crown-4 Derivatives for an Ion-Selective Electrode", Anal. Chem., 1993, 65, 3404.

取扱条件

取扱条件
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イオン電極用試薬―イオノフォア TTD-14-crown-4 

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日本同仁化学核染色用色素 

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核染色用色素 Cellstain®– Hoechst 33342 solution

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®– Hoechst 33342 solution

核染色用色素 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

核染色用色素

  • 製品コード
    H342  –Cellstain®– Hoechst 33342 solution
  • CAS番号
    23491-52-3(Hoechst 33342:free base)
  • 化学名
    2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride, solution
  • 分子式・分子量
    C27H31Cl3N6O=561.93
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 ml ¥5,200 346-07951
  • 核染色用色素 
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マニュアル

  • プロトコル 核染色用色素  細胞を染色したい
    核染色用色素 
  • パンフレット 核染色用色素  細胞増殖測定細胞染色プロトコル
    核染色用色素 

参考文献

参考文献を表示する

1) M. J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, "Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry", J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.
2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H. L. Roelen, van J. H. Boo and A. H. Wang, "Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex", Biochemistry, 1992, 31(47), 11823.
3) Y. Tadokoro, K. Yomogida, Y. Yagura, S. Yamada, M. Okabe and Y. Nishimune, "Characterization of Histone H2A.X Expression in Testis and Specific Labeling of Germ Cells at the Commitment Stage of Meiosis with Histone H2A.X Promoter-Enhanced Green Fluorescent Protein Transgene", Biol. Reprod., 2003, 69, 1325.
4) F. Wada, A. Ogawa, Y. Hanai, A. Nakamura, M. Maki and K. Hitomi, "Analyses of Expression and Localization of Two Mammalian-Type Transglutaminases in Physarum polycephalum, an Acellular Slime Mold", J. Biochem.(Tokyo), 2004, 136, 665.
5) M. Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, "Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes", Cells., 2019, 8, (4), 373
6) T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

よくある質問

Q

Hoechst 33258 ,Hoechst 33342 solutionの波長とこの2つの違いについて教えて下さい。

A

波長は以下の通りです。
Hoechst33342 Ex:350 nm Em:461 nm
Hoechst33258 Ex:352 nm Em:461 nm

基本的な使用方法は両方とも同じです。
弊社の製品は水溶液になっておりますので、
ご希望の濃度の希釈し、添加して下さい。

この二つの違いですが、基本的にはAdenine-Thymidine部に特異的に結合する薬品です。
生細胞の膜も通過し、生細胞のDNAとも結合します。
膜の透過率はHoechst 33342の方が若干上です。
Hoechst33258はdsDNA selectiveのようです。

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。

【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度がEBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

核染色用色素 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488nm励起で観察されることもあります

Q

Hoechst33342の使用方法を教えてください。

A

一例として下記に示します。
・フローサイトメトリーによる培養株化細胞あるいは固形腫瘍の例
 

【試薬】

Hoechst33324 solution (1 mg/mL, 1.78 mmol/L)

【操作】

1)培養株化細胞あるいは固形腫瘍を0.25%トリプシンにて分離、浮遊細胞を用意する。

2)培養液で10 μmol/L Hoechst33342溶液とする。

3)細胞浮遊液105個あたり、10 μmol/L Hoechst33342溶液を1 mL加える。

4)37℃,60分インキュベートする。

5)この染色液をフローサイトメトリーで測定する。

励起波長:352 nm、蛍光波長:461 nm

核染色用色素  核染色用色素 

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色液体である。
含量: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
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核染色用色素 

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日本同仁化学グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue Glucose Uptake Assay Kit-Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットBlue

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • 蛍光顕微鏡やフローサイトメーターで測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP01  Glucose Uptake Assay Kit-Blue
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥40,000 342-09871

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Blue
WI Solution (50×)
×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 
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マニュアル

  • 取扱説明書 グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue  日本語
    グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 
  • 取扱説明書 グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue  English
    グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

技術情報

既存法よりココが良い!4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Blueは青色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Blueはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

Glucose Uptake Probe-Blueは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Blueを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

Probe solutionは保存可能でしょうか?

A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を一度行ってください。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

初期検討としてプローブ濃度(x250~x1,000)や染色時間(15分~1時間程度)をご検討下さい。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか?

A

室温で約1時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか?

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか?

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue  グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵
SDSダウンロード
グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

関連製品

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    グルコース取り込み検出キットRed

    Glucose Uptake Assay Kit-Red

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    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

日本同仁化学イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6 TD19C6

11 イオン電極用試薬

TD19C6

イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―イオノフォア

  • 製品コード
    T402  TD19C6
  • CAS番号
    259874-18-5
  • 化学名
    2,6,13,16,23,26-Hexaoxaheptacyclo[25.4.4.47,12.417,22.01,17.07,12.017,22]tritetracontane
  • 分子式・分子量
    C37H62O6=602.88
容 量 メーカー希望
小売価格
¥特注品
  • イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6 
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • プロトコル イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6 

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Suzuki, D. Siswanta, T. Otsuka, T. Amano, T. Ikeda, H. Hisamoto, R. Yoshihara and S. Ohba, "Design and Synthesis of a More Highly Selective Ammonium Ionophore Than Nonactin and Its Application as an Ion-Sensing Component for an Ion-Selective Electrode", Anal. Chem., 2000, 72, 2200.

取扱条件

取扱条件
SDSダウンロード
イオン電極用試薬―イオノフォア TD19C6 

関連製品

日本同仁化学死細胞染色色素 -Cellstain®- PI 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI Cellstain®– PI

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®– PI

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

死細胞染色色素

  • 製品コード
    P346  –Cellstain®– PI
  • CAS番号
    25535-16-4
  • 化学名
    3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide
  • 分子式・分子量
    C27H34I2N4=668.39
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 mg ¥5,000 343-07461

【注意】
Cellstain®– PIは、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。
内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。(Free Dial:0120-489-548)

  • 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • プロトコル 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI  細胞を染色したい
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 
  • パンフレット 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI  細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 

参考文献

参考文献を表示する

1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, "An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations", J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.
2) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, "Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt's Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model", Cancer Res., 1989, 49, 3783.
3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, "Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms", Cytometry, 1991, 12, 330.
4) C. Souchier, M. Ffrench, M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, "Methods for Cell Proloferation Analysis by Fluorescent Image Cytometry", Cytometry, 1995, 20, 203.
5) T. Irino, T. Kitoh, K. Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M. Schuster and M. Osaka, "Establishment of Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase Expression", Mol. Diagn., 2004, 6, 217.

よくある質問

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。

【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度が
EBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを
利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

PIの使用方法を教えてください。

A

下記に例を示します。細胞の種類、観察条件により細胞の固定や試薬濃度を検討してください。

【使用例①】

Vollenweiderらはリンフォカイン活性化キラー(LAK)細胞の増殖アッセイにおいて、PI染色を行い、蛍光プレートリーダーを用いて測定している。
その時の濃度はストック溶液で 0.5 mg/mL PBS(-) 。使用濃度は 5 μg/mL クエン酸ナトリウム溶液を用い、1well当たり100 μL使用して蛍光染色している。
・I.Vollenweider, P.Groscurth, J.Immunol.Methods, 149, 133(1992).

【使用例②】

(1) 固形腫瘍あるいはcluster を含むサンプルについては、0.02% tripsin EDTAにて処理。

     37℃にて30分間インキュベート後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(2) -20℃の50% メタノールにて固定後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(3) -20℃の30% メタノールにて洗浄後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(4) 0.2 mol/L phosphate buffer(pH7.2)にて洗浄後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(5) RNaseの0.2 mol/L phosphate buffer(pH7.2)溶液(1mg/mL)を細胞106個あたり

     0.2 mL加え、37℃にて30分間インキュベートする。

(6) 0.2 mol/L phosphate にて洗浄後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(7) PI溶液(50 μg/mL)を10mL加え、4℃にて2時間、遮光の上染色を行う。

・”フローサイトメトリー入門”より、医学書院発行

Q

EBやPIを使用した際の廃棄物があります。処理はどのようにすればよいですか?

A

*施設によりガイドラインが定められている場合があります。ガイドラインがある場合にはそれに従って下さい。

廃液は排水処理設備がある場合には、排水として流してください。処理設備がない場合、排水は貯めておいて処理業者に依頼してください。

染色したゲルなどは乾燥して、焼却処分してください。

蛍光性物質を分解する場合には下記のような方法もあります。
・UV照射や日光にさらし分解する。
・次亜塩素酸ナトリウムにより酸化分解後、中和処理する。

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI  死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 

取扱条件

規格
性状: 本品は、赤褐色粉末又は固体で水及び希塩酸に溶ける。
水溶状: 試験適合
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
SDSダウンロード
死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI 

関連製品

日本同仁化学グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green Glucose Uptake Assay Kit-Green

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Green

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットGreen

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • プレートリーダーを用いて測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP02  Glucose Uptake Assay Kit-Green
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥38,000 347-09821

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well plate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Green
WI Solution (50×)
×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green  日本語
    グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 
  • 取扱説明書 グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green  English
    グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

技術情報

既存法よりココが良い!4つの特徴

高輝度の色素を採用したことにより、既存法(2-NBDG)よりも高感度かつ短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

 

No. Sample Publication
1) 細胞
(HeLa)
W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
2)
(B. licheniformis; P. stutzeri)
M. Jiang, Q. Li, S. Hu, P. He, Y. Chen, D. Cai, Y. Wu, S. Chen, "Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin", 2022, doi:10.1016/j.cej.2022.134686.

 

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Greenはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞 Probe stock solutinの希釈倍率 染色時間
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549 x 500 15分
ヒト肝癌由来細胞 HepG2 x 500 15分
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1) x 500 15分
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1) x 500 15分
悪性黒色腫 MO5 x 500 15分
マウス筋芽細胞 C2C12 x 500 5分
アストロサイト―マ U-251 MG x 500 15分
ヒト子宮頸癌由来細胞 HeLa x 500 15分
ルイス肺がん由来細胞 3LL x 50000 15分
T細胞 CD4+ T cell x 50, x500 15分
マウスマクロファージ様株化細胞 J774.1 x 500 15分
線虫 N2 x 500 90分

Q

Glucose Uptake Probe-Greenは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Greenを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか?

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q

Probe working solutionは保存可能でしょうか?

A

Probe working solutionは保存できません。Probe stock solutionは冷凍保存が一か月間可能です。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

初期検討としてプローブ濃度(x250~x1,000)や染色時間(15分~1時間程度)をご検討下さい。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。WI solutionによる洗浄操作をもう一度行ってください。

Q

Glucose Uptake Probe-Greenに細胞毒性はありますか?

A

弊社製品のCell Counting Kit-8 (CK04)を用いてA549細胞におけるプローブの細胞毒性を調査した結果、細胞毒性は確認されませんでした。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか?

A

室温で約1時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか?

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか?

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green  グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵
SDSダウンロード
グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

    α-ケトグルタル酸測定キット

    α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

日本同仁化学死細胞染色色素 -Cellstain®- PI solution 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution Cellstain®– PI solution

03 分子生物学関連試薬
05 細胞染色用色素

Cellstain®– PI solution

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 

  • 分子生物学関連試薬
  • 細胞染色用色素

死細胞染色色素

  • 製品コード
    P378  –Cellstain®– PI solution
  • CAS番号
    25535-16-4(PI)
  • 化学名
    3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide, solution
  • 分子式・分子量
    C27H34I2N4=668.39
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 ml ¥6,000 341-07881
  • 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • プロトコル 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution  細胞を染色したい
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 
  • パンフレット 死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution  細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 

参考文献

参考文献を表示する

1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, "An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations", J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.
2) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, "Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt's Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model", Cancer Res., 1989, 49, 3783.
3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, "Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms", Cytometry, 1991, 12, 330.
4) C. Souchier, M. Ffrench, M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, "Methods for Cell Proloferation Analysis by Fluorescent Image Cytometry", Cytometry, 1995, 20, 203.
5)T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

よくある質問

Q

核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか?

A

ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。

【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度が
EBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
2重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
2重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを
利用して、2重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342、33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

固定化後に染色すると、核が染まらないのですが何か対策はありますか?

A

固定化および膜透過処理の条件によっては核が染まらないことがあります。
その際は、処理条件をご検討頂く必要があります。

なお、PFA(パラホルムアルデヒド)固定化処理を長時間することで、核が染まらない事例がございます。
下記、弊社での事例を参考に固定化および膜透過処理の条件をご検討ください。

○PIで核を染色できた処理条件
使用細胞 : HeLa細胞
固定化処理:4% PFA/PBSにて5分間インキュベート
膜透過処理:1% Triton X-100/PBSにて20分間インキュベート

上記処理後に、PI solution 30 μg/mLにて染色して観察

○PI染色後、核が染まらない結果となった条件
使用細胞 : HeLa細胞
固定化処理:2% PFA/PBSにて60分間インキュベート
膜透過処理:1% NP-40/PBSにて60分間インキュベート

上記処理後に、PI solution 30 μg/mLにて染色して観察

Q

PIの使用方法を教えてください。

A

下記に例を示します。細胞の種類、観察条件により細胞の固定や試薬濃度を検討してください。

【使用例①】

Vollenweiderらはリンフォカイン活性化キラー(LAK)細胞の増殖アッセイにおいて、PI染色を行い、蛍光プレートリーダーを用いて測定している。
その時の濃度はストック溶液で 0.5 mg/mL PBS(-) 。使用濃度は 5 μg/mL クエン酸ナトリウム溶液を用い、1well当たり100μL使用して蛍光染色している。
・I.Vollenweider, P.Groscurth, J.Immunol.Methods, 149, 133(1992).

【使用例②】

(1) 固形腫瘍あるいはcluster を含むサンプルについては、0.02% tripsin EDTAにて処理。

     37℃にて30分間インキュベート後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(2) -20℃の50% メタノールにて固定後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(3) -20℃の30% メタノールにて洗浄後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(4) 0.2 mol/L phosphate buffer(pH7.2)にて洗浄後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(5) RNaseの0.2 mol/L phosphate buffer(pH7.2)溶液(1 mg/mL)を細胞106個あたり

     0.2 mL加え、37℃にて30分間インキュベートする。

(6) 0.2 mol/L phosphate にて洗浄後、1500rpmで5分間行い、上清を捨てる。

(7) PI溶液(50 μg/mL)を10mL加え、4℃にて2時間、遮光の上染色を行う。

・”フローサイトメトリー入門”より、医学書院発行

Q

EBやPIを使用した際の廃棄物があります。処理はどのようにすればよいですか?

A

*施設によりガイドラインが定められている場合があります。ガイドラインがある場合にはそれに従って下さい。

廃液は排水処理設備がある場合には、排水として流してください。下記方法により分解して、廃水処理すればより安全です。

・UV照射や日光にさらし分解する。
・次亜塩素酸ナトリウム等により酸化分解する。

処理設備がない場合、分解し、廃水を貯めておいて処理業者に依頼してください。

染色したゲルなどは乾燥して、焼却処分してください。

死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution  死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 

取扱条件

規格
性状: 本品は、橙色~赤色液体の凍結品である。
含量: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷凍,遮光
SDSダウンロード
死細胞染色色素 -Cellstain&reg;- PI solution 

関連製品

日本同仁化学イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB 

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イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB TFPB

11 イオン電極用試薬

TFPB

イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―アニオン排除剤

  • 製品コード
    T037  TFPB
  • CAS番号
    79060-88-1
  • 化学名
    Tetrakis[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]borate, sodium salt
  • 分子式・分子量
    C32H12BF24Na=886.2
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
100 mg ¥14,000 345-05341
1 g ¥77,800 349-05344
  • イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB 
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  • プロトコル イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB 

技術情報

溶解例

400 mg/10 mL(ジエチルエーテル)

参考文献

参考文献を表示する

1) H. Kobayashi, T. Sonoda, H. Iwamoto and M. Yoshimura, "Tetrakis[3,5-di(F-methyl) phenyl] borate as the First Efficient Negatively Charged Phase Transfer Catalyst. Kinetic Evidences", Chem. Lett., 1981, 579. 
2) H. Kobayashi, T. Sonoda and H. Iwamoto, "The First Application of Anion-catalyzed Phase-transfer Catalysis to Friedel-Crafts Alkylation", Chem. Lett.1982, 1185. 
3) Y. Takahashi, N. Yoneda and H. Nagai, "Facile and Highly Selective Synthesis of 2,2-Dialkyl-1,5-Lactones by the Calboxylation of Primary, Tertiary-1,4-Diols with Formic Acid or Copper(I)Carbonyls in the Presence of Concentrated Sulfuric Acid", Chem. Lett., 1982, 1187. 
4) H. Iwamoto, M. Yoshimura, T. Sonoda and H. Kobayashi, "Anion-Catalyzed Phase-Transfer Catalysis. I. Application to Diazo-Coupling Reactions", Bull. Chem. Soc. Jpn.,1983, 56, 796. 
5) H. Iwamoto, T. Sonoda and H. Kobayashi, "Diazotization of Pentafluoroaniline by Means of Anion-Catalyzed Phase Transfer Catalysis in a Hydrophobic Organic Solvent", J. Fluorine Chem., 198424, 535. 
6) H. Nishida, N. Takada, M. Yoshimura, T. Sonoda and H. Kobayashi, "Tetrakis[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]borate. Highly Lipophilic Stable Anionic Agent for Solvent-extraction of Cations", Bull. Chem. Soc. Jpn.198457, 2600. 
7) Y. Shiraki, K. Onitsuka, K. Takuma, T. Sonoda and H. Kobayashi, "Anion-Catalyzed Phase-Transfer Catalysis. II. Effects of Anionic Tetrakis[3,5-Bis(Trifluoromethyl)Phenyl]Borate Catalyst in Phase-Transfer-Catalyzed Sulfonium Ylide Formation", Bull. Chem. Soc. Jpn.198558, 3041. 
8) N. Ishibashi, T. Imato, G. H. Zhang, Y. Asano, T. Sonoda and H. Kobayashi, "Vitamin B1-Sensitive Poly(vinyl chloride) Membrane Electrode Based on Hydrophobic Tetraphenylborate Cation Exchangers", Anal. Sci.19884, 527. 
9) 市川淳士, 小林宏, 園田高明, "TFPBイオンを用いたアニオン型相間移動触媒反応", 有機合成化学, 198846, 943. 
10) G. H. Zhang, T. Imato, Y. Asano, T. Sonoda, H. Kobayashi and N. Ishibashi, "Vitamin B1-Sensitive Poly(vinyl chloride) Membrane Electrode Based on Hydrophobic Tetraphenylborate Derivatives and Their Application", Anal. Chem., 199062, 1644. 
11) T. Nagamura, Y. Isoda, K. Sakai and T. Ogawa, "Control of Molecular Orientation of 4,4'-Bipyridinium Cation Radicals in Novel Photochromic Monolayer Assemblies", J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1990, 703. 
12) T. Nagamura and Y. Isoda, "Novel Photochromic Polymer Films Containing Ion-pair Charge-transfer Complexes of 4,4'-Bipyridinium Ions for Optical Recording", J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1991, 72. 
13) M. Kira, T. Hino and H. Sakurai, "An NMR Study of the Formation of Silyloxonium Ions by Using Tetrakis[3, 5-Bis(Trifluoromethyl)Phenyl]Borate as Counteranion", J. Am. Chem. Soc.1992114, 6697. 
14) T. Katsu and K. Watanabe, "イオン電極法による薬・毒物の定量 (Determination of Drug Substances Using Ion-Selective Electrodes)", Jpn. J. Toxicol. Environ. Health,199642, 453.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色結晶性粉末でエーテルに溶ける。
純度(滴定,無水物換算): 99.0% 以上
ジエチルエーテル溶状: 試験適合
水分: 4.5~5.5%
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
PRTR法 第1種指定化学物質
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イオン電極用試薬―アニオン排除剤 TFPB 

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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose-I Agarose-I

03 分子生物学関連試薬

Agarose-I

  • 分子生物学関連試薬

分子生物学関連試薬-Agarose

  • 製品コード
    A003  Agarose-I
  • CAS番号
    9012-36-6
  • 化学名
    Agarose
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
25 g ¥8,600 346-00072
100 g ¥24,200 344-00073
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マニュアル

  • プロトコル 分子生物学関連試薬-Agarose Agarose-I  核酸を検出したい
    分子生物学関連試薬-Agarose Agarose-I 

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~灰黄白色粉末である。
水溶状: 試験適合
強熱残分(硫酸塩): 1.0% 以下
硫黄含量: 0.30% 以下
ゲル強度: 800 g/cm2 以上
取扱条件
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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose-I 

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イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 DOPP DOPP

11 イオン電極用試薬

DOPP

イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 DOPP 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒

  • 製品コード
    D016  DOPP
  • CAS番号
    1754-47-8
  • 化学名
    Di-n-octyl phenylphosphonate
  • 分子式・分子量
    C22H39O3P=382.52
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
1 g ¥21,800 347-04701
5 g ¥76,600 343-04703
  • イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 DOPP 
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  • プロトコル イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 DOPP  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 DOPP 

参考文献

参考文献を表示する

1) G. H. Griffiths, G. J. Moody and J. D. R. Thomas, "An Investigation of the Optimum Composition of Poly(Vinyl Chloride)Matrix Membranes Used for Selective Calcium-Sensitive Electrodes", Analyst197297, 420. 
2) A. J. Frend, G. J. Moody and J. D. R. Thomas, "Studies of Calcium Ion-selective Electrodes in the Presence of Anionic Surfactants", Analyst1983108, 1072. 
3) S. A. H. Khalil, G. J. Moody and J. D. R. Thomas, "Studies of Calcium Ion-selective Electrodes in the Presence of Biochemical Materials", Analyst1985110, 353. 
4) V. P. Y. Gadzekpo, G. J. Moody and D. R. Thomas, "Coated-Wire Lithium Ion-Selective Electrodes Based on Polyalkoxylate Complexes", Analyst1985110, 1381. 
5) K. Hiratani, T. Okada and H. Sugihara, "Di-n-Octyl Phenyl Phosphonate: a Plasticizer of Poly(Vinyl Chloride)Matrix Membrane Electrodes Behaving as a Li+– Selective Agent", Bull. Chem. Soc. Jpn.198659, 2015. 
6) Sajedah A. H. Khalil, G. J. Moody, J. D. R. Thomas and Jose L. F. C. Lima, "Epoxy-Based All-Solid-State Poly(Vinyl Chloride) Matrix Membrane Calcium Ion-Selective Microelectrodes", Analyst1986111, 611. 
7) T. Okada, H. Sugihara and K. Hiratani, "Calcium-Selective Electrodes Based on Noncyclicpolyether Diamides", Anal. Chim. Acta, 1986186, 307. 
8) H. Sakamoto, K. Kimura and T. Shono, "Lithium Separation and Enrichment by Proton-Driven Cation Transport through Liquid Membranes of Lipophilic Crown Nitrophenols", Anal. Chem.1987, 59, 1513. 
9) K. Hiratani, T. Okada and H. Sugihara, "1, 3-Bis(8-quinolyloxy)propane Derivatives as Neutral Carriers for Lithium Ion Selective Electrodes", Anal. Chem.198759, 767. 
10) K. Kimura, H. Oishi, T. Miura and T. Shono, "Lithuim Ion Selective Electrodes Based on Crown Ethers for Serum Lithium Assay", Anal. Chem. , 198759, 2331. 
11) T. Okada, K. Hiratani and H. Sugihara, "Use of Lipophilic Additives for the Improvement of the Characteristics of PVC Membrane Lithium-selective Electrodesbased on Non-Cyclic Neutral Carriers", Analyst1987112, 587. 
12) A. M. Y. Jaber, G. J. Moody and J. D. R. Thomas, "Studies on Lead Ion-selective Electrodes Based on Polyalkoxylates", Analyst, 1988, 113, 1409. 
13) F. N. Assubaie, G. J. Moody and D. R. Thomast, "Guanidinium Ion-Selective Electrodes Based on Dibenzo-27-Crown-9 and Tetraphenylborate", Analyst1988113, 61. 
14) H. Wang, "Properties of DOPP in Plasticized PVC Membranes", J. Electroanal. Chem.1995382, 165.

取扱条件

規格
性状: 本品は、無色液体である。
純度(GC): 95.0% 以上
屈折率(25℃): 1.473~1.477
薄層クロマトグラフィー: 試験適合
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
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イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 DOPP 

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グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red Glucose Uptake Assay Kit-Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Red

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットRed

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • プレートリーダーやフローサイトメーターでも測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP03  Glucose Uptake Assay Kit-Red
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥40,000 349-09881

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Red
WI Solution (50×)
×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 
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マニュアル

  • 取扱説明書 グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red  日本語
    グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 
  • 取扱説明書 グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red  English
    グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 

技術情報

既存法よりココが良い!4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Redは赤色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。
また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Redはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

Glucose Uptake Probe-Redは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Redを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか?

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q

Probe working solutionは保存可能でしょうか?

A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

初期検討としてプローブ濃度(x250~x1,000)や染色時間(15分~1時間程度)をご検討下さい。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を行ってください。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか?

A

室温で約1時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか?

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか?

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red  グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 

取扱条件

取扱条件
1.保存方法:冷蔵
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グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 

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日本共立理化学研究所PACKTEST 余氯(游离)水质测试包

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PACKTEST 余氯(游离)

测量次数 50

PACKTEST 余氯(游离)

类型: WAK-ClO-DP

  • 工序和质量控制
  • 饮用水检验
  • 教材与自由研究
  • 农业(施肥管理)
  • 水质事故调查(河川)
  • 卫生管理(消毒剂)

PACKTEST是最简单的水质测量仪器。

该产品可以测量各种测试水中的游离余氯, 包括自来水和游泳池水等。

测量次数 50

SPECIFICATION 产品规格

测量原理 DPD比色法
测量刻度 0.1, 0.2, 0.4, 1, 2, 5 mg/L
测量时间 10 秒
是否可在海水中使用
内容物 软管 50个 (5个装的层压袋 10包), 保存袋 1个, 标准色紙 (盒装) 1个, 使用说明 1张
包装外形 165L × 110W × 65H mm
包装重量 大约 140 g

DOCUMENTS 文件

PACKTEST 余氯(游离) 使用说明

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日本同仁化学イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE 

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イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE NPOE

11 イオン電極用試薬

NPOE

イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE 

  • イオン電極用試薬

イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒

  • 製品コード
    N015  NPOE
  • CAS番号
    37682-29-4
  • 化学名
    2-Nitrophenyl octyl ether
  • 分子式・分子量
    C14H21NO3=251.32
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
25 g ¥22,800 347-04522
  • イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE 
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  • プロトコル イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE  イオン濃度を電極で測りたい
    イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE 

技術情報

溶解例

125 mg/mL(アセトニトリル)

参考文献

参考文献を表示する

1) M. Oehme, M. Kessler and W. Simon, "Neutral Carrier Ca2+-microelectrode", Chimia, 1976, 30, 204.
2) H. Tamura, K. Kimura and T. Shono, "Effect of Plasticizer on the Selectivity of Potassium-selective PVC Membrane Electrodes Based on Bis(Crown ether)s", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1980, 53, 547.
3) H. Tamura, K. Kumami, K. Kimura and T. Shono, "Simultaneous Determination of Sodium and Potassium in Human Urine of Serum Using Coated-wire Ion-selective Electrodes Based on Bis(crown ether)s", Mikrochim. Acta, 1983, 2, 287.
4) N. Ishibashi, T. Masadome and T. Imato, "Surfactant-selective Electrode Based on Poly(vinyl chloride) Membrane Plasticized with o-Nitrophenyl octyl ether", Anal. Sci., 1986, 2, 487.
5) E. Metzger, R. Dohner, W. Simon, D. J. Vonderschmitt and K. Gautschi, "Lithium/Sodium Ion Concentration Ratio Measurements in Blood Serum with Lithium and Sodium Ion Selective Liquid Membrane Electrodes", Anal. Chem., 1987, 59, 1600.
6) H. Sakamoto, K. Kimura and T. Shono, "Lithium Separation and Enrichment by Proton-Driven Cation Transport through Liquid Membranes of Lipophilic Crown Nitrophenols", Anal. Chem., 1987, 59, 1513.
7) H. Sakamoto, K. Kimura, Y. Koseki and T. Shono, "Highly Selective Cation Transport Through Membranes Containing Lipophilic Bis(monoaza-crown ether)s", J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 1987, 1181.
8) S. Koizumi, T. Imato and N. Ishibashi, "Anion Selective Electrode for High Performance Liquid Chromatography Detector Based on Oleophilicanion-exchange Resin Membrane", Anal. Sci., 1987, 3, 319.
9) 正留隆, 今任稔彦, 石橋信彦, "イオン交換基を含まないポリ塩化ビニール膜型テトラフェニルホウ酸イオン電極の試作とその電位差滴定への応用", 分析化学, 1987, 36, 508.
10) F. N. Assubaie, G. J. Moody and J. D. Thomas, "Guanidinium Ion-selective Electrodes Based on Dibenzo-27-crown-9 and Tetraphenylborate", Analyst, 1988, 113, 61.
11) M. Sugawara, M. Omoto, H. Yoshida and Y. Umezawa, "Enhancement of Uphill Transport by a Double Carrier Membrane System", Anal. Chem., 1988, 60, 2301.
12) S. Kamata, A. Bhale, Y. Fukunaga and H. Murata, "Copper(II)-selective Electrode Using Thiuram Disulfide Neutral Carriers", Anal. Chem., 1988, 60, 2464.
13) 澤田恵夫, 大堺利行, 千田貢, "o-ニトロフェニルエーテル類/水界面の分極性とそのイオン移動ボルタンメトリーへの応用", 分析化学, 1990, 39, 539.
14) T. Katsu, K. Yamanaka, S. Hiramaki, T. Tanaka and T. Nagamatsu, "Potentiometric Determination of Alkaline Phosphatase in Blood Serum Using a Hordenine-sensitive Membrane Electrode", Electroanalysis, 1996, 8, 1101.
15) T. Katsu and K. Watanabe, "イオン電極法による薬・毒物の定量 (Determination of Drug Substances Using Ion-selective Electrodes)", Jpn. J. Toxicol. Environ. Health, 1996, 42, 453.
    

取扱条件

規格
性状: 本品は、淡黄色液体である。
純度(HPLC): 99.0% 以上
吸光度: 0.042 以下(470 nm)
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
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イオン電極用試薬―液膜型イオン電極用溶媒 NPOE 

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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 900 Agarose 900

03 分子生物学関連試薬

Agarose 900

  • 分子生物学関連試薬

分子生物学関連試薬-Agarose

  • 製品コード
    A426  Agarose 900
  • CAS番号
    9012-36-6
  • 化学名
    Agarose
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
25 g ¥8,600 341-07842
100 g ¥24,200 343-07841
試験成績書

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マニュアル

  • プロトコル 分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 900  電気泳動で核酸を分離したい
    分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 900 

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~灰黄白色粉末である。
水溶状: 試験適合
強熱残分(硫酸塩): 1.0% 以下
乾燥減量(80℃): 22.0% 以下
硫黄含量: 0.30% 以下
ゲル強度: 800 g/cm2 以上
凝固温度: 35~40℃
融解温度: 87~91℃
DNase活性: 不検出
RNase活性: 不検出
バックグラウンド試験: 試験適合
取扱条件
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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 900 

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日本同仁化学アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit Amino Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Amino Acid Uptake Assay Kit

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

アミノ酸取り込み検出キット

  • アミノ酸取り込み能力を簡便に検出できる
  • 蛍光顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターを用いて検出が可能
  • 製品コード
    UP04  Amino Acid Uptake Assay Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 tests ¥16,000 346-09891
100 tests ¥45,000 342-09893

<使用回数の目安> 100 testsあたり、35 mm dish 10枚、96-well plate 1枚

キット内容
20 tests BPA Solution
BPA Dilution Buffer
Probe Solution 
35 ×l×1
35 ×l×1
15 ×l×1
100 tests BPA Solution
BPA Dilution Buffer
Probe Solution 
175 ×l×1
175 ×l×1
75 ×l×1

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit  日本語
    アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 
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    アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 

技術情報

この製品でできること

アミノ酸の取り込みを阻害する薬剤を抗がん剤としてスクリーニングしたり、正常細胞とがん細胞の取り込み能力を比較することができます。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 

よくある質問

Q

BPAはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

BPAは、LAT1, LAT2, ATB0,+を介して取り込まれることが報告されています(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。また、小社では、LAT1の阻害剤BCHや、LAT1の基質であるleucineなどの競合阻害実験でBPAの取り込みが阻害されることを確認しています。

Q

使用実績のある細胞種を教えて下さい。

A

付着細胞(HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251), 浮遊細胞(MOLT4)

Q

BPAは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

BPAは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q

BPAを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

BPAは細胞内での局在性はありますか?

A

取り込まれたBPAは細胞内に均一に存在します。

Q

BPA uptake solution, Working solutionは保存可能でしょうか?

A

BPA uptake solution, Working solutionは保存できません。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

2点原因が考えられるため、以下のようにすると改善される可能性があります。
①BPA uptake solutionの取り込み量が少ない可能性があります。その場合は、BPA Solutionの希釈倍率を下げてご検討ください。(5~50倍希釈)
②Working solutionが劣化している可能性があります。再度、Working solutionを調製してください。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったBPAがウェル内に残存している可能性があります。
HBSSによる洗浄を繰り返してください。

Q

BPAの定量はできますか?

A

取り込まれたBPAの定量を行う事はできません。本キットは、アミノ酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

Q

蛍光測定用のマイクロプレートはどのようなものが使えますか?

A

使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

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取扱条件

取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍(-20℃)
危険・有害
シンボルマーク
アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 
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