蛋白酶[枯草杆菌][对地衣芽孢杆菌] Protease (Subtilisin A from Bacillus licheniformis) 货号:E-BSPRT-100ML Megazyme中文站

蛋白酶[枯草杆菌][对地衣芽孢杆菌]

英文名:Protease (Subtilisin A from Bacillus licheniformis)

货号:E-BSPRT-100ML

规格:5 grams – 100ML

High purity Protease (Subtilisin A from B. licheniformis) (liquid) for use in research, biochemical enzyme assays an in vitro diagnostic analysis.

EC 3.4.21.14

Protease.

From Bacillus licheniformis. Highly purified. In 50% glycerol. For use in Megazyme Total Dietary Fiber test method. 

Specific activity: ~ 6 U/mg of protein; 300 U/ml (40oC, pH 8.0, casein as substrate). 

Stable at 4oC for > 4 years.

Data booklets for each pack size are located in the Technical Resources tab.

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兽药混合标准溶液(染料类)


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
224-02103 Veterinary Drug Mixture Standard Solution (Dye) (each 20μg/ml Methanol Solution)
 兽药混合标准溶液(染料类)(各20μg/ml)
1mlx5A for High Performance Liquid Chromatography
228-02101 Veterinary Drug Mixture Standard Solution (Dye) (each 20μg/ml Methanol Solution)
 兽药混合标准液(染料类)(各20μg/ml甲醇溶液)
1ml for High Performance Liquid Chromatography

兽药混合标准溶液(染料类)(各20μg/ml)

Veterinary Drug Mixture Standard Solution (Dye) (each 20μg/ml Methanol Solution)

 

◆成分


结晶紫,碱性绿1,亚甲蓝

 

每个成分浓度为:20μg/ml; 




◆相关产品


产品编号

产品名

中文名

包装

220-02203

Veterinary   Drug Mixture Standard Solution (Hormone) (each 20μg/ml Acetonitrile Sol

兽药混合标准液(激素类)(各20μg/ml乙腈溶液)

1ml

224-02201

1ml x5A

225-02091

Veterinary   Drug Mixture Standard Solution (Macrolide) (each 20μg/ml Acetonitrile Sol

兽药混合标准液(大环内酯类)(各20μg/ml乙腈溶液)

1ml

221-02093

1ml x5A

227-02051

Veterinary   Drug Mixture Standard Solution (Quinolone) (each 20μg/ml)

兽药混合标准液(喹诺酮类药物)(各20μg/ml)

1ml

223-02053

1ml x5A

224-02083

Veterinary   Drug Mixture Standard Solution (Sulfonamide+Antifolate) (each 20μg/ml)

兽药混合标准溶液(磺胺类+抗叶酸制剂类)(各20μg/ml)

1ml x5A

228-02081

1ml

220-01681

Veterinary   Drug Mixture Standard Solution PL-1-3 (each 20μg/ml   Methanol Solution)

兽药混合标准液PL-1-3(各20μg/ml甲醇溶液)

1ml x 5A

226-01683

1ml

223-01693

Veterinary   Drug Mixture Standard Solution PL-2-1 (each 20μg/ml   Methanol Solution)

兽药混合标准液PL-2-1(各20μg/ml甲醇溶液)

1ml

227-01691

1ml x5A

O-A5BMIX 22,32-di-α-L-Arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotriose plus 32-α-L-arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotetraose 货号:O-A5BMIX Megazyme中文站

O-A5BMIX

英文名:22,32-di-α-L-Arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotriose plus 32-α-L-arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotetraose

货号:O-A5BMIX

规格:20 mg

22,32-di-α-L-Arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotriose plus 32-α-L-arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotetraose

 

 

CAS: 1237488-32-2
Molecular Formula: C25H42O21
Molecular Weight: 678.6
Purity: > 70%

22,32-di-α-L-arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotriose plus 32-α-L-arabinofuranosyl-(1,5)-α-L-arabinotetraose for use in research, biochemical enzyme assays and in vitro diagnostic analysis. This mixture contains these two pentasaccharides in ~ 1:1 ratio. It can be used as an analytical standard or as a substrate to help characterise the activities of arabinoxylan degrading enzymes including endo-1,5-α-arabinanase and α-L-arabinofuranosidase. This compound was prepared by the controlled enzymatic hydrolysis of debranched sugar beet arabinan.

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泛素化试剂盒


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格

Ubiquitinylation kit泛素化试剂盒

泛素化试剂盒



◆用于合成泛素-E2硫酯的多功能工具

● 能合成一系列由硫酯连接的泛素缀合酶E2的理想方法

● 生物素化的泛素能对连接了链霉亲和素的酶进行灵敏检测

● 试剂盒供50次50 μL的反应使用


泛素化试剂盒是一套在泛素化实验中用于合成泛素-E2硫酯的试剂。该试剂盒利用泛素级联反应中前两个步骤来产生一系列由硫酯连接的泛素缀合酶(E2s);用于将泛素转移至E3泛素连接酶;然后对靶蛋白进行泛素化。生物素化的泛素能有助硫酯的形成,并能对泛素缀合物进行高灵敏度检测。

建议用法:合成用于泛素化实验的泛素-E2硫酯;在专用的E3泛素连接酶的参与下对靶蛋白进行泛素化;对用于与新型E2酶通过硫酯连接的泛素进行活化;使用细胞裂解液或粗提物/制备剂为来源的E3泛素连接酶来促进泛素化;不依赖底物(目标蛋白)的体外泛素化反应。

泛素化试剂盒

图1.

酯测试Western Blotting能够适用于所有E2缀合酶。操作步骤按照“Assay Protocol”部分所述的进行。

生物素化-泛素-酶共聚物通过蛋白质印迹法的硫酯测试来检测,其中分别包括:

A: UbcH1 (Prod. No. BML-UW9020)、B: UbcH2 (Prod. No. BML-UW9025)、

C: UbcH3 (Prod. No. BML-UW8730)、D: UbcH5a (Prod. No. BML-UW9050)、

E: UbcH5b (Prod. No. BML-UW9060)、F: UbcH5c (Prod. No. BML-UW9070)、

G: UbcH6 (Prod. No. BML-UW8710)、H: UbcH7 (Prod. No. BML-UW9080)、

I: UbcH8 (Prod. No. BML-UW9135)、J: UbcH10 (Prod. No. BML-UW0960)、

K: Ubc13/MMS2 (Prod. No. BML-UW9565),

而使用“Analysis by Western Blotting”部分所述的链霉亲和素-辣根过氧化物酶检测系统的有M: 生物素化SDS分子量标记 (Sigma, SDS-6B) 从下到上: 20.1, 29.0, 39.8, 58.1 kDa。



◆产品规格


应用注释

用法:

1. 在专用的E3泛素连接酶参与下对靶蛋白进行泛素化。E2的家族能够产生E2-Ub硫酯

    缀合物以用于测试,以及与特定E3/靶蛋白的结合。

    例如:p53在mdm2(E3)和UbcH5b(E2)10的参与下进行泛素化。

2. 活化用于将硫酯与新型E2酶缀合的泛素。(在直接可比的条件下,可使用试剂盒中

    的E2s作为替代)

3. 使用细胞裂解液或粗提物/制备液作为E3泛素连接酶的来源,在泛素化试剂盒组分的

    参与下,促进已纯化的靶蛋白的泛素化。

4. 不依赖底物(目标蛋白)的体外泛素化反应。确定E3酶的泛素连接活性/特异性以及

    它们的催化结构域/片段11。

注:应用1和2提供的方案可以通过包含、省略或替代特定的酶组分来修改,从而应用

       于其他实验。

质量

试剂盒包含了足够进行4次含有E2酶反应的材料。

使用/稳定性

试剂盒的所有组分应在-80°C下储存以确保稳定性和活性。

储存

避免反复冻融

运输

干冰运输

长期储存

-80℃

组分

20×泛素活化酶溶液
人,重组 E1(His6-tagged), 125 µL, 产品编号BML-UW9410
   
10× 泛素缀合酶溶液 (E2)
每种E2酶有20 µL
UbcH1(His6-tagged),产品编号:BML-UW9020
UbcH2(His6-tagged),产品编号:BML-UW9025
UbcH3(His6-tagged),产品编号:BML-UW8730
UbcH5a(His6-tagged),产品编号:BML-UW9050
UbcH5b(His6-tagged),产品编号:BML-UW9060
UbcH5c(His6-tagged),产品编号:BML-UW9070
UbcH6(His6-tagged),产品编号:BML-UW8710
UbcH7(His6-tagged),产品编号:BML-UW9080
UbcH8(His6-tagged),产品编号:BML-UW9135
UbcH10(untagged),产品编号:BML-UW0960
UbcH13/Mms2(His6-tagged),产品编号:BML-UW9565
   
20×生物素化泛素溶液 (Bt-Ub), 125 µL,产品编号:BML-UW8705
20× Mg-ATP溶液, 125 µL,产品编号:BML-EW9805
2×非还原性凝胶上样缓冲液, 2.5 mL,产品编号:BML-KW9880
10× 泛素化缓冲液, 250 µL,产品编号:BML-KW9885

产品编号

产品名称

产品规格

BML-UW9920-0001

Ubiquitinylation kit
泛素化试剂盒

1 kit

◆相关产品


产品编号

产品名称

产品规格

BML-UW8995-0001

UBI-QAPTURE-Q kit
纯化试剂

20 tests

BML-UW9915-0001

Ubiquitin   conjugating kit (HeLa lysate-based)
泛素结合试剂盒(HeLa细胞裂解液)   

20 tests

BML-UW0970-0001

Auto-ubiquitinylation kit
自泛素化试剂盒

10 tests

BML-UW0590-0001

NEDDylation Kit
NEDD化试剂盒

20 tests

BML-UW0400A-0001

Ubiquitin activating kit
泛素激活试剂盒

96 wells

参考文献



◆ 产品相关文献


  1.

BTK blocks the inhibitory effects of MDM2 on p53 activity: M. Rada, et al.; Oncotarget 8, 106639 (2017), AbstractFull Text

  2.

Hepatocyte TRAF3 promotes liver steatosis and systemic insulin resistance through targeting TAK1-dependent signalling: P.X. Wang, et al.; Nat. Commun. 7, 10592 (2016), Application(s):

In vitro ubiquitination assays, AbstractFull Text

  3.

Host cell-catalyzed S-palmitoylation mediates Golgi targeting of the Legionella ubiquitin

ligase GobX: Y.H. Lin, et al.; J. Biol. Chem. 290, 25766 (2015), Application(s): Western Blot,

AbstractFull Text

  4.

TRIM30α Is a Negative-Feedback Regulator of the Intracellular DNA and DNA Virus-Triggered Response by Targeting STING: Y. Wang, et al.; PLoS Pathog. 11, e1005012 (2015),

 Application(s): In vitro ubiquitination assay, Abstract; Full Text

  5.

TRIM35 negatively regulates TLR7- and TLR9-mediated type I interferon production by targeting IRF7: Y. Wang, et al.; FEBS Lett. 589, 1322 (2015), Application(s): In vitro

ubiquitination assay, Abstract;

  6.

Parkin loss of function contributes to RTP801 elevation and neurodegeneration in

Parkinson's disease: J. Romaní-Aumedes, et al.; Cell Death Dis. 5, e1364 (2014), Abstract;


  7.

Rlim, an E3 ubiquitin ligase, influences the stability of Stathmin protein in human

osteosarcoma cells: X. Chen, et al.; Cell Signal. 26, 1532 (2014), Abstract;


  8.

Stability of the human pregnane X receptor is regulated by E3 ligase UBR5 and

serine/threonine kinase DYRK2: S.S. Ong, et al.; Biochem. J. 459, 193 (2014), Abstract;


  9.

Ubiquitin-proteasome-mediated degradation of S-RNase in a solanaceous

cross-compatibility reaction: T. Entani, et al.; Plant J. 78, 1014 (2014), Abstract;


10.

E3 ubiquitin ligase RNF126 promotes cancer cell proliferation by targeting the tumor

suppressor p21 for ubiquitin-mediated degradation: X. Zhi, et al.; Cancer Res. 73, 385

(2013), Abstract;


11.

The E3 ubiquitin ligase MARCH8 negatively regulates IL-1β-induced NF-κB activation by

targeting the IL1RAP coreceptor for ubiquitination and degradation: R. Chen, et al.; Proc.

Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 14128 (2012), AbstractFull Text

12.

TRIM32 protein modulates type I interferon induction and cellular antiviral response by targeting MITA/STING protein for K63-linked ubiquitination: J. Zhang, et al.; J. Biol. Chem. 287, 28646 (2012), Abstract;


13.

Cullin 4B protein ubiquitin ligase targets peroxiredoxin III for degradation: X. Li, et al.; J.

Biol. Chem. 286, 32344 (2011), AbstractFull Text

14.

Tripartite motif 8 (TRIM8) modulates TNFα- and IL-1β-triggered NF-κB activation by

targeting TAK1 for K63-linked polyubiquitination: Q. Li, et al.; Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 

108, 19341 (2011), AbstractFull Text

15.

1-Benzyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline binds with tubulin beta, a substrate of parkin, and

reduces its polyubiquitination: R. Kohta, et al.; J. Neurochem. 114, 1291 (2010), Abstract;


16.

Pasteurella multocida Toxin-induced Pim-1 expression disrupts suppressor of cytokine

signalling (SOCS)-1 activity: D. Hildebrand, et al.; Cell. Microbiol. 12, 1732 (2010), Abstract;


17.

The E3 ubiquitin ligase RNF5 targets virus-induced signaling adaptor for ubiquitination and

degradation: B. Zhong, et al.; J. Immunol. 184, 6249 (2010), AbstractFull Text

18.

The Fbw7 tumor suppressor targets KLF5 for ubiquitin-mediated degradation and

suppresses breast cell proliferation: D. Zhao, et al.; Cancer Res. 70, 4728 (2010), 

AbstractFull Text

19.

REUL is a novel E3 ubiquitin ligase and stimulator of retinoic-acid-inducible gene-I: D. Gao, et al.; PLoS One 4, e5760 (2009), AbstractFull Text

◆一般参考文献

  1.

Regulation of p53 by the ubiquitin-conjugating enzymes UbcH5B/C in vivo: M.K. Saville, et al.;

J. Biol. Chem. 279, 42169 (42169), Abstract;

  2.

Characterization of the novel E3 ubiquitin ligase encoded in exon 3 of herpes simplex

virus-1-infected cell protein 0: R. Hagglund, et al.; PNAS 99, 7889 (2002), Abstract;

  3.

Mechanisms underlying ubiquitination: C.M. Pickart, et al.; Annu. Rev. Biochem. 70, 503 (2001),

Abstract;

  4.

Functions of the MDM2 oncoprotein: D.A. Freedman; Cell Mol. Life. Sci. 55, 96 (1999), Abstract;

  5.

Regulation of the p53 tumor suppressor protein: M. Oren, et al.; J. Biol. Chem. 274, 36031

(1999), Abstract;

  6.

The p53 pathway: C. Prives, et al.; J. Pathol. 187, 112 (1999), Abstract;

  7.

The ubiquitin-proteasome system and endocytosis: G.J. Strous, et al.; J. Cell. Sci. 112 ,

1417 (1999), Abstract;

  8.

The ubiquitin system: A. Hershko, et al.; Annu. Rev. Biochem. 67, 425 (1998), Abstract;

  9.

Pathways of ubiquitin conjugation: A.L. Haas, et al.; FASEB J. 11, 1257 (1997), Abstract;

10.

P53 and mdm-2: interactions between tumor suppressor gene and oncogene products:

M. Perry, et al.; Mt. Sinai J. Med. 61, 291 (1994), Abstract;

11.

The p53 tumor suppressor gene: A.J. Levine, et al.; J. Lab. Clin. Med. 123, 817 (1994), Abstract;

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
ISK-AB-001-EX GenomONE™-CAb EX 1 vial Antibody Delivery Reagents
 GenomONETM CAb EX 抗体导入试剂
1 set
ISK-AB-004-EX GenomONE™-CAb EX 1 vial Antibody Delivery Reagents
 GenomONETM CAb EX 抗体导入试剂
1 set

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

新一代细胞功能和胞内蛋白研究工具——通过HVJ-E将IgG抗体高效导入活细胞内!


◆原理


GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂


  IgG抗体分子与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后,形成HVJ-E载体。利用HVJ病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。   

  GenomONE-Neo EX从2007年开始商品化销售,试剂盒内的IgG结合增强剂*,促使IgG分子能够更高效的进入到HVJ-E载体内;正是这个特性,GenomONE-Neo EX系统能够更有效的将IgG分子导入到细胞质内。

  * 相关 GenomONE-CAb 研发文献: Kondo Y. et al., J. Immunol. Methods, 332,10-17(2008).


优点、特色


 筛查细胞内的抗原抗体反应。

  通过细胞内抗原抗体反应表现出的中和作用筛选 

 先进的胞内抗体导入技术(不同于现有的敲除法)。

  不同于转录后基因沉默(RNAi干扰等),该方法通过识别蛋白质-蛋白质相互作用或翻译后修饰(添加

  糖链等)方法,达到特异性抑制不产生非特异性反应(RNAi干扰的脱靶效应等)。

  不同于转基因表达的方法,该法可快速简单地将大量抗体高效导入活细胞,适用于各种不同类型的研究

 细胞内功能分析。

  抗体导入活细胞后,检测目标分子的胞内分布情况。

  抗体导入活细胞后,抑制或证明目标分子的作用。

  活细胞成像。

 用于检查、诊断和治疗。

  检查和诊断的新一代试剂,利用抗体捕获活细胞内的分子靶标。

  新一代抗体药,直接作用于细胞内分子靶标。



案例、应用


【Anti-α-tubulin antibody导入Hs68细胞】

【抗体】 

  Monoclonal Anti-α-tubulin, Clone DM1A, Mouse IgG1 (SIGMA, T6199)

【流程】 

  Hs68: 人包皮成纤维细胞(ATCC-CRL-1635), 1×104 cells/well, 

  0.5%FCS/DMEM (8 well-chambered coverglass;Nunc 155411)

 GenomONE- CAb与Anti-α-tubulinmAb (5μg) 混合后加入细胞 

 37℃培养2hr

 清洗细胞 (PBS)

 固定细胞 (4% PFA; for 15min at r.t., 0.2% Triton X-100; for 5 min at r.t.,1%BSA; o/n)

 Alexa Fluor 488-Goat Anti-Mouse IgG, F(ab’)2<Invitrogen A11017>

 清洗细胞 (PBS)

 SYTO 82 (Invitrogen S11363)

 激光扫描共聚焦显微镜下观察

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

抗体与微管蛋白细丝特异性结合细胞核用SYTO82染色(红)



【Anti-NPC (核孔蛋白) antibody导入 HeLa S3细胞】

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

导入抗体后

  导入anti-NPC antibody 后24hr,观察到的荧光强度和2hr时相比没有明显变化,这表明抗体可在2hr内捕获NPC,并且形成的复合物在24hr内稳定。

【细胞系】 HeLa S3: 人宫颈癌细胞(ATCC CCL 2.2)

【抗体】 Monoclonal Anti-Nuclear Pore Complex Proteins, Clone 414; Mouse IgG1(SIGMA, N8786)

试剂盒组成


Cat.  #

HVJ-E


 (inactivated HVJ)
Freeze-dried
0.26 mL /vial
 (when reconstituted)

ReagentⅠ

 (antibody incorporation  enhancer)
 Freeze-dried
0.26 mL/vial
(when  reconstituted)

ReagentⅡ
       (incorporation
  reagent)
0.3 mL/vial

ReagentⅢ
       (introduction
 enhancer)
1 mL/vial

Buffer

(for suspension
 and dilution)
6.5 mL/vial

ISK-AB001-EX  1  vial  1  vial  1  vial  1  vial  1  vial
ISK-AB004-EX  4  vials  4  vials  1  vial  4  vials  1  vial



*1  vial HVJ-E 最多可转52块8孔细胞培养板

相关资料


◆试剂适用的抗体类型


  同类型IgG抗体导入到HS-68细胞(人包皮成纤维细胞;   ATCC CRL-1635)的结果

物种 IgG 亚型*1 抗体进入 HVJ-E的效率*2 抗体导入 HS-68细胞的效率*3
小鼠 pAb
IgG1
IgG2a
IgG2b
IgG3
大鼠 pAb
IgG1
IgG2a
IgG2b
IgG2c
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
兔子 pAb
山羊 pAb

*1:pAb:多克隆抗体,其它:单克隆抗体(对照IgG)
*2:抗体进入   HVJ-E的效率:
  ◎:40%以上,○;20-40%,△;小于20%
*3:抗体导入   HS-68细胞的效率:
  ◎:高效导入,○;可以导入,△;可能导入,但效率低

◆运用GenomONE-CAb导入IgG抗体的细胞类型

物种 细胞系 细胞来源 抗体类型
肿瘤、贴壁细胞
HeLa   S3 宫颈癌上皮 小鼠   lgG pAB
小鼠 lgG 1mAB
A549 肺癌 小鼠   lgG 1mAB
SAS 舌癌 小鼠   lgG pAB
HT1080 纤维肉瘤 小鼠   lgG pAB
MCF-7 乳腺癌 小鼠   lgG2a mAB
小鼠 P19 胚胎癌 小鼠   lgG pAB
小鼠 Raw264.7 单核细胞白血病 小鼠   lgG pAB
肿瘤、非贴壁细胞
Jurkat T细胞白血病 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 P3-X63-Ag8.653 骨髓瘤 小鼠   lgG1 mAB
正常、贴壁细胞
WI-38 肺成纤维细胞 小鼠   lgG1 mAB
Hs68 皮肤成纤维细胞 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 3T3-L1 胚胎成纤维细胞未分化 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 3T3-L1,   adipocyte 胚胎成纤维细胞分化 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 BNL   CL2 胚胎肝细胞 小鼠   IgG1 mAb
仓鼠 BHK-21 肾成纤维细胞 小鼠   lgG1 mAB
正常、原代细胞
HAEC 主动脉内皮 小鼠   lgG1 mAB
pAb:   多克隆抗体, mAb: 单克隆抗体

◆同系列相关产品


 产品编号  产品名称  规格  应用
 ISK-GN-001-EX   GenomONE™-Neo EX HVJ-E 1 vial Transfection  Reagents  1 set  DNA、siRNA、ODN及蛋白转染(体内体外适用)
  ISK-CF-001-EX  GenomONE™ -CF EX SeV-E(HVJ-E)1 vail Cell Fusion Reagents  1 set  细胞融合试剂