WAKO LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit

上海金畔生物科技有限公司提供WAKO LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit

WAKO LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit

碱性磷酸酶定量检测试剂盒

可用于人,大鼠以及小鼠血清样本的检测

(本试剂盒仅为研究试剂,不可用于诊断或做其他用途。)

LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit 碱性磷酸酶定量检测试剂盒

【摘要】

碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。

碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒,利用微孔板,可进行多种样品的检测。

【检测原理】

样品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸盐缓冲液(pH9.8)中反应,在样品中的碱性磷酸酶作用下,p-硝基苯磷酸分解为p-硝基酚和磷酸。生成的p-硝基酚为碱性,呈黄色。根据测量其405nm的吸光值,计算出样品中碱性磷酸酶的活性。

 

291-58601 LabAssay TM ALP  [p-硝基苯磷酸基质法]

【性能】

检测范围:>0.06 mmol/L

标准曲线范围:0~0.5 mmol/L

再现性:CV<10%

【试剂盒组成】

底物————————-20片(溶解时:p-硝基苯磷酸二钠 6.7mmol/L)

底物溶解液——————-100ml×1瓶(2.0mmol/L氯化镁含有0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH9.8)

反应终止液——————-100ml×1瓶(0.2mol/L氢氧化钠溶液)

标准液———————–10ml×1瓶(0.5mmol/L p-硝基酚溶液)

【试剂的配制】

底物缓冲液:1片底物溶解于5mL底物溶解液中。

反应终止液:直接使用。

系列稀释标准液:将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。

【标准操作法】

向96孔微孔板内添加100μl底物缓冲液和20μl样品,在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后,37℃孵育15分钟。

添加80μl反应终止液,在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后,用酶标仪测量405nm处的吸光值。同样方法进行空白(蒸馏水)对照和标准品的检测。

【活性单位的定义】

在pH9.8,37℃情况下,1分钟内生成1nmol p-硝基酚所需的酶的活性为1个活力单位(U)。

活性(U/μl)= C/15 ×a

C:由标准曲线得到的OD值(A实验值减去A空白值),计算p-硝基酚浓度(mmol/L=nmol/μl)

15:反应时间(min.)

a:样品的稀释倍数
当样品为成骨细胞时,使用本试剂盒前样本需要预处理

在48孔板上进行细胞培养后,除去培养基,用PBS冲洗感光板,各孔添加150μl 0.05%的曲拉通X,进行冻结→融化→冻结→融化操作。4℃,15,000rpm离心15分钟处理,将上清液移到新的辅助管,以此作为样品。

(注1)48孔板:培养时,一般不采用96孔板,多使用48孔板。

(注2) 曲拉通X的作用:溶解细胞膜,回收蛋白(细胞内含有ALP蛋白)的试剂。

(注3) 反复的冻结融化:原理不明,但这样做似乎可以提高ALP活性。

(注4) 也有不使用曲拉通X,用超声波降解法(超声波处理)对细胞造成物理性休克得到溶解产物的方法。

(注5) 曲拉通X的添加量:以150μL为例,孔中细胞约为20,000cell。

 

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