重组赖氨酰内肽酶RLys-C


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重组赖氨酰内肽酶RLys-C重组赖氨酰内肽酶RLys-C

◆概述


赖氨酰内肽酶最早从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到,能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键,常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。

艾美迪选用Achromobacter lyticus来源的,克服大肠杆菌重组表达技术难题进行制备。本品最适pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0;最适反应温度30~37℃,50℃以上稳定性下降。在适宜温度下,该酶稳定性良好,在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后,生物活性未发生降低。可广泛用于蛋白组学分析,蛋白、抗体类药物质量检测,多肽、蛋白类产品制备工艺中。

 


◆特性


● 高比活性,高特异性,可消化难以酶切的位点,空间构象复杂或疏水性较强的蛋白(如膜蛋白)同样适用

● 活性稳定,尿素、乙腈等变性剂耐受能力强

● 批量化生产,连续批次质量稳定,批间差小

● 高纯度,重组表达避免了可能存在的杂酶残留(e.g. Arg-C,Lys-N等)



◆来源


重组 E. coli 菌株,其克隆有来自的无色杆菌(A. lyticus蛋白酶I基因。

 


◆酶活定义


0.2 mol/L pH 9.0Tris-HCl缓冲中,温度为37±2℃的条件下, 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量为一个活性单位(AU)。

 


◆纯度


将 rLys-C以DTT 还原处理后, 还原电泳显示纯度>99%


重组赖氨酰内肽酶RLys-C

◆使用方法


本品为冻干粉,使用前先使用超纯水或25 mmol/L Tris-HCl,pH 8.0~8.5溶解。



◆应用实例


RLys-C酶切重组人门冬胰岛素原(Pro-Insulin-Aspart)

底物Pro-Insulin-Aspart分子量约为7 kDa,含有3个赖氨酸(K),采用 Lys-C 酶切的理论肽段示意图如下:


重组赖氨酰内肽酶RLys-C

酶切条件酶与底物的质量比为 1:10000,在50 mM Tris-HCl,pH 8.5中37℃酶切16 小时。


重组赖氨酰内肽酶RLys-C


峰 A:酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart

峰 B:酶切后 B链+C肽+A链(去引导肽)

峰 C:酶切后B链+A链(去引导肽和C肽)



名称 

RT 

Area 

Area% 

质谱量 

酶切位点 

对应肽段

Pro-Insulin-Aspart
    未酶切对照 

10.45

155.045

100%

7096.94

酶切前

以IMD-RLys-C-酶切产物
(酶:底物1:10000)

11.57

201.6

100%

5724.54

B链+A链

以其他公司重组Lys-C酶产物
(酶:底物1:10000)

10.49

146.9

61.78%

7096.94

酶切前

10.62

81.5

34.29%

6006.84

① 

B链+C肽+A链

艾美迪 的 RLys-C 酶切产物为切除引导肽和 C 肽的门冬胰岛素前体,酶切位点①②③均酶切完全。

而其他公司产品仅部分切开酶切位点①,切除效率仅为34.29%,酶切位点②③均未被酶切,未能得到序列正确的门冬胰岛素前体。

◆与其他公司产品对比


底物 

酶切位点对比 

艾美迪 

其他公司重组Lys-C

重组人门冬胰岛素原

(Pro-Insulin Aspart)

分子量约为7 kDa,含有3个K

①PK

++ 

+

②DK

++ 

③GK

++ 

重组人普通胰岛素原

(Pro-Insulin)

分子量约为7 kDa,含有3个K

①PK 

++ 

+

②PK 

++ 

+

②AK 

++ 

+

PJ-10S小肽
分子量约为1 kDa,含有3个K

①DK 

++ 

+


相同底物浓度的酶切条件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率显著高于其他品牌同类产品。以生成的肽段 YDDDDK 计算,艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同类产品高约9倍;以生成的肽段 RGWK 计算,艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同类产品高约8.6倍。



◆产品信息

产品编号

产品名称

活性单位

规格

RLYS-C0401

重组赖氨酰内肽酶

RLys-C

3.0 AU/mg

20 μg

RLYS-C0403

重组赖氨酰内肽酶

RLys-C

3.0 AU/mg

1 mg

◆相关产品


产品编号

产品名称

活性单位

规格

RME0101

重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装
    Lys-C + Trypsin

3.0 AU/mg

20 μg

RME0102

重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装
    Lys-C + Trypsin

3.0 AU/mg

20 μg x

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